[发明专利]4‑松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法

摘要

本发明公开了一种4‑松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法，通过优化调整培养基的成分及比例，筛选得到可以促进4‑松油醇型互叶白千层组培继代芽生根的培养基配方，添加适宜的抑菌剂，再辅以适宜的温度和光照，建立4‑松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法。本方法能能大幅降低生根培养阶段的生产成品，并且有效控制开放式生根培养的污染率，生根培养周期短，生根培养6～8天后萌发出根系，生根率达到97.8～99.5 %，继续培养至15天后统计，生根率可达到100%，污染率低于10%，且苗木根系健壮、发达，移栽成活率高，达到97.4～98.8%，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

主权项

一种4‑松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法，其特征在于：包括继代芽壮苗培养、生根培养基配制、生根培养、炼苗、移栽5个工序，其操作步骤如下：（1）继代芽壮苗培养：采用常规继代培养基进行继代芽的增殖培养；当继代芽单芽长度达到1.0cm时，增加光照促使单芽老练；（2）生根培养基配制：培养基配方采用2/5～4/5改良WPM培养基或1/5～3/5改良B5培养基附加IBA 0.05～1.5 mg/L、ABT6号 0.05～1.5 mg/L、蔗糖15000 mg/L、琼脂6.0g/L，在洁净的环境中，将培养基按照配方配制好后，持续煮沸20分钟，调节pH值至5.8～6.0，加入抑菌剂后混匀，分装在一次性聚乙烯塑料杯中，每杯用保鲜膜覆盖并用橡胶圈固定，待降温凝结后使用；（3）生根培养：将步骤（1）继代芽继续培养使芽伸长，选择长度1.0cm以上，并且绿色明显加深，稍木质化的单芽在超净台中剪下，并接种于步骤（2）中配制好的生根培养基中生根培养；（4）炼苗：当步骤（3）单芽生根培养至根系长度达到1.5cm后，将瓶苗移至室外具有遮阴装置的大棚中进行炼苗，遮阴度要求为75～85 %，炼苗10～15天；（5）移栽：将步骤（4）炼苗后的小苗从杯中取出，清水洗去根系附着的培养基，移栽至消毒处理后淋透清水的红心土或轻基质营养杯中，用塑料薄膜和遮阴网进行保湿遮阴2～3天后，按常规方法管护，当苗高30cm以上、无病虫害的4‑松油醇型互叶白千层组培苗木出圃造林；步骤（2）中所述的抑菌剂成分为：头孢霉素50～150mg/L， 50％的可湿性粉剂多菌灵4～10%，4‑松油醇型互叶白千层枝叶浸出液1～5%；所述的4‑松油醇型互叶白千层枝叶浸出液的制备方法为：取一年生4‑松油醇型互叶白千层枝叶250g，剪短至5cm小段后加入试剂瓶中，再加入75%的酒精1L并密封，置于4℃冰箱中浸泡48小时，过滤获得浸出液；步骤（3）所述生根培养的条件为：温度（28～30）±2℃，光照1500～3000 lx，每日光照12 ～16小时；所述改良WPM培养基的组分和体积重量比为：NH4NO3330 mg/L、CaCl2·2H2O96 mg/L、MgSO4·7H2O370 mg/L、KH2PO4170 mg/L、Ca(NO3)2·4H2O180 mg/L、KI 0.83mg/L、MnSO4·H2O22.4 mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025 mg/L、Na2·EDTA37.3 mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、肌醇200mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5 mg/L、盐酸硫胺素1.0 mg/L、甘氨酸2.0 mg/L；所述改良B5培养基的组分和体积重量比为：KNO3 2500 mg/L、CaCl2•2H2O150 mg/L、MgSO4•7H2O250mg/L、(NH4)2SO4134mg/L、NaH2PO4•H2O150mg/L、Ca(NO3)2•4H2O 200mg/L、KI0.83mg/L、H3BO33.0mg/L、MnSO4•H2O10mg/L、ZnSO4•7H2O2.0mg/L、Na2MoO4•2H2O0.25mg/L、CuSO4•5H2O0.025mg/L、Na2•EDTA 37.3mg/L、FeSO4•7H2O27.8 mg/L、肌醇200mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素1.0mg/L、甘氨酸 2.0 mg/L。