[发明专利]一种牙鲆幼鱼性腺mRNA原位杂交的方法有效
| 申请号： | 201610080377.1 | 申请日： | 2016-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN105624304B | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 焦爽;范兆飞;尤锋;徐冬冬;谭训刚 | 申请（专利权）人： | 中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6841 | 分类号： | C12Q1/6841 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 李颖;周秀梅 |
| 地址： | 266071*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及幼鱼性腺mRNA原位杂交技术，具体的说是一种牙鲆幼鱼性腺mRNA原位杂交的方法。取洗涤后样品经过量浓度为4％PFA溶液固定；固定后用100％甲醇溶液于‑20℃保存，将上述固定后保存样品经处理作为原位杂交样品；上述原位杂交样品进行复水、洗涤、蛋白酶K消化、固定而后经洗涤、预杂交，预杂交后与含有牙鲆RNA探针的杂交液混合于50‑70℃下杂交过夜；杂交处理后洗涤，并经抗体孵育，再洗涤，避光显色，终止显色，再固定，再洗涤，20‑30％蔗糖沉降；上述沉降样品经OCT包埋后进行冰冻切片，进而实现对牙鲆幼鱼性腺mRNA原位杂交的标记。本发明的实施能够清晰地描述牙鲆相关基因在性腺中的定位(mRNA水平)，取得了突破性的进展。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 幼鱼 性腺 mrna 原位杂交 方法 | ||
【主权项】：
1.一种牙鲆幼鱼性腺mRNA原位杂交的方法，其特征在于：1）取洗涤后样品经过量浓度为4% PFA溶液固定；固定后用100%甲醇溶液于‑20℃保存，将上述固定后保存样品经处理作为原位杂交样品；2）上述原位杂交样品进行复水、洗涤、蛋白酶K消化、固定而后经洗涤、预杂交，预杂交后与含有牙鲆RNA探针的杂交液混合于50‑70℃下杂交过夜；杂交处理后洗涤，并经抗体孵育，再洗涤，避光显色，终止显色，再固定，再洗涤， 20‑30%蔗糖沉降；3）上述沉降样品经OCT包埋后进行冰冻切片，进而实现对牙鲆幼鱼性腺mRNA原位杂交的标记；步骤1）中样品为根据幼鱼全长不同分别取样，幼鱼全长<60.0 mm的取其整个腹部；幼鱼全长>60.0 mm直接剥离性腺，取样后无RNA酶的PBS缓冲液漂洗，待用；步骤1）中固定后保存样品经处理为腹部样品去除多余内脏；或，性腺样品的系膜剥离去除、将性腺样品切成约5mm。
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