[发明专利]以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法在审
| 申请号： | 201610083241.6 | 申请日： | 2016-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN105586335A | 公开（公告）日： | 2016-05-18 |
| 发明（设计）人： | 徐学明;鲁隼;冯俊清 | 申请（专利权）人： | 广州复能基因有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘宇峰 |
| 地址： | 510663 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法。该方法包括：针对miR-155前体序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；从miR-155前体cDNA质粒中，采用步骤A的所述引物，通过PCR扩增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针。本发明得到的cRNA探针能够全部覆盖所有靶序列。本发明探针制备方法简化了探针制备步骤，大幅度缩短整个实验时间，探针特异性和稳定性更强，背景信号更低且灵敏度更高。在此基础上，本发明提供了一种快速检测胰腺癌相关的miR-155表达的试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | mir 155 模板 制备 rna 探针 方法 | ||
【主权项】：
一种以miR‑155前体为模板制备RNA探针的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.针对miR‑155前体序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；B.从miR‑155前体cDNA质粒中，采用步骤A的所述引物，通过PCR扩增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；C.加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针。
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