[发明专利]促进人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化的方法在审
申请号: | 201610084124.1 | 申请日: | 2016-02-04 |
公开(公告)号: | CN105647856A | 公开(公告)日: | 2016-06-08 |
发明(设计)人: | 李洲;么秀华;黄慧玲;孙雪莲;朱建民;魏华英;李召雨;刘江;周洪锐;刘晓华;李昀地;杨延瑞;范维佳 | 申请(专利权)人: | 关节动力安达(天津)生物科技有限公司;天津中新科炬生物制药有限公司;天津市神经外科研究所 |
主分类号: | C12N5/077 | 分类号: | C12N5/077 |
代理公司: | 天津市鼎和专利商标代理有限公司 12101 | 代理人: | 崔继民 |
地址: | 300308 天津市*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | 本发明公开了一种促进人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化的方法,将人脐带组织剪碎,消化成单细胞,离心,用间充质干细胞完全培养液重悬细胞,过筛,培养得到高纯度的人脐带间充质干细胞;再将培养至第3代的间充质干细胞收集并离心,用间充质干细胞完全培养液重悬细胞接种到底面积为25cm2培养瓶中,细胞完全铺满瓶底后,培养液更换为软骨细胞诱导液进行向软骨细胞的分化,细胞分化第1天开始每瓶同时加入不同浓度的牛磺酸,共培养16天即得分化的软骨细胞。本发明添加的牛磺酸是人体所需的,使用安全;能够提高间充质干细胞向软骨细胞分化的能力。 | ||
搜索关键词: | 促进 脐带 间充质 干细胞 软骨 细胞 分化 方法 | ||
【主权项】:
一种促进人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)人脐带间充质干细胞的培养:将废弃的人脐带组织剪碎,用质量体积比浓度0.1%的二型胶原酶消化成单个的细胞,离心;用间充质干细胞完全培养液重悬细胞,过筛,收集细胞悬液,于37℃、体积分数为5%CO2和95%空气、绝对湿度条件下进行培养,每隔1天换培养液,得高纯度的脐带间充质干细胞;(2)向软骨细胞诱导分化:将培养至第3代的脐带间充质干细胞收集并离心,用间充质干细胞完全培养液重悬细胞接种到底面积为25cm2培养瓶中,细胞完全铺满瓶底后,培养液更换为软骨细胞诱导液进行向软骨细胞的分化,细胞分化第1天开始加入0.1‑10mM牛磺酸,共培养16天即得分化的软骨细胞。
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