[发明专利]检测EGFR和/或K-ras基因突变的引物、探针及试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测人类表皮生长因子受体(EGFR)基因和/或K‑ras基因的引物、探针，包含该引物和探针的试剂盒，以及一种基于数字PCR平台检测基因突变的装置。使用本发明的引物和探针检测基因突变的方法包括：提供所述引物及探针；提取待测样品的DNA；配制扩增突变基因序列的荧光PCR反应体系；用目标探针与内参探针分别与扩增产物杂交，并检测相应荧光基团的荧光信号；根据目标探针与内参探针的荧光信号的强度和比例，判断基因突变的存在和/或计算突变率。本发明的检测基因突变的方法所需引物及探针数量少，优化过程简单，可以定性或定量地检测EGFR和/或K‑ras基因的相关突变，且检测灵敏度高；对低起始量的DNA样本，也能够稳定检出。

主权项

用于检测人类EGFR基因第18‑21号外显子突变的引物及探针，包括以下四组引物和探针或与其具有至少60％同一性、优选至少80％同一性、更优选至少90％同一性的核苷酸序列：(1)用于检测EGFR基因第18号外显子突变的引物及探针：上游引物SEQ ID NO:1：5’‑CCTTGTCTCTGTGTTCTTGT‑3’；下游引物SEQ ID NO:2：5’‑TGTGCCAGGGACCTTAC‑3’；目标探针SEQ ID NO:3：5’‑CCGGAGCCCAGCTCTTTGATCT‑3’；(2)用于检测EGFR基因第19号外显子突变的引物及探针：上游引物SEQ ID NO:5：5’‑TAAAATTCCCGTCGCTATCAA‑3’；下游引物SEQ ID NO:6：5’‑AAAGGTGGGCCTGAGGTTCA‑3’；目标探针SEQ ID NO:7：5’‑GTTCAGAGCCATGGACCC‑3’；(3)用于检测EGFR基因第20号外显子突变的引物及探针：上游引物SEQ ID NO:9：5’‑AGGCAGCCGAAGGGCA‑3’；下游引物SEQ ID NO:10：5’‑CCTCACCTCCACCGTGCA‑3’；突变型探针SEQ ID NO:11：5’‑TGAGCCGCGTGATGA‑3’；野生型探针SEQ ID NO:12：5’‑TGAGCCGCATGATGA‑3’；(4)用于检测EGFR基因第21号外显子突变的引物及探针：上游引物SEQ ID NO:13：5’‑AACACCGCAGCATGTCAAGA‑3’；下游引物SEQ ID NO:14：5’‑TTCTCTTCCGCACCCAGC‑3’；突变型探针SEQ ID NO:15：5’‑TTGGGCGGGCCAAACTGCTG‑3’；野生型探针SEQ ID NO:16：5’‑TTGGGCTGGCCAAACTGCTG‑3’。