[发明专利]一种用于植物显微结构观察的荧光染色方法

摘要

本发明涉及用于植物显微结构观察的荧光染色方法，可有效解决快速制片，对植物显微结构的观察问题，方法是，将植物材料切制成长宽各1‑5mm的小块或小段，将植物材料置于由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇中固定20‑40min，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10‑20min，由DMSO、Triton X‑100和荧光增白剂220制成染色液，在室温下染色10‑60min，然后用PBS缓冲液漂洗10‑15min，滴加DAPI溶液对细胞中核酸进行荧光染色，蒸馏水漂洗，再滴加甘油，加盖玻片，用激光共聚焦显微镜观察照相，本发明方法简单，无需切片机，制片时间短，可以观察到植物的三维构造，适用于各种植物的细胞或组织的观察，清晰、准确，成本低，效果好。

主权项

一种用于植物显微结构观察的荧光染色方法，其特征在于，由以下步骤实现：1）.取材取植物材料，切制成长宽各1‑5mm的小块或小段；所述的植物材料为花粉粒，胚囊、花柱、胚珠、叶片、根或茎；2）.固定室温下，将植物材料置于由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇中固定20‑40min；3）.第一次漂洗从固定液中取出植物材料，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10‑20min；4）.染色将漂洗后的植物材料滴加由质量浓度1‑3%的DMSO 0.02‑0.1ml、质量浓度0.02‑0.2%的Triton X‑100 0.02‑0.1ml，0.05‑0.2%的荧光增白剂220 0.02‑0.1ml制成的染色液，在室温下染色10‑60min；5）.第二次漂洗将染色后的植物材料取出，放在载玻片上，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10‑15min；6）.核酸染色二次漂洗后的植物材料滴加质量浓度0.01‑0.05%的DAPI溶液0.02‑0.06ml，室温下，对细胞中核酸进行荧光染色10‑20min；7）.封片用蒸馏水漂洗，除去表面的染色液，再滴加质量浓度10‑20%的甘油，将植物材料表面覆盖，加盖玻片；8）.观察用激光共聚焦显微镜观察照相，实现对植物显微结构的观察。