[发明专利]用于定量检测RPRM基因DNA甲基化试剂盒及方法

摘要

本发明提供了用于定量检测RPRM基因DNA甲基化试剂盒及方法，所述的试剂盒包含：重亚硫酸盐转化反应液，玻璃纤维膜离心柱，结合缓冲液，漂洗缓冲液、脱硫缓冲液，洗脱缓冲液，2×SYBR GREEN I预混反应液，引物RPRM‑F与RPRM‑R，甲基化阳性对照质粒S_M及非甲基化阳性对照质粒S_U。在2小时内完成对DNA的重亚硫酸盐转化，经纯化后，通过特异的引物对转化后的RPRM基因DNA区域进行PCR扩增，然后进行甲基化敏感的熔解曲线分析（MS‑MCA），从而检测是否有RPRM基因的甲基化及甲基化的程度。该方法以血浆为检测样本，操作程序大为简化、灵敏度高、特异性好、检测结果稳定，有重要的应用前景。

主权项

1.用于定量检测RPRM基因DNA甲基化试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含DNA转化试剂组分：重亚硫酸盐转化反应液，DNA纯化试剂组分：玻璃纤维膜离心柱、结合缓冲液、漂洗缓冲液、脱硫缓冲液、洗脱缓冲液，甲基化检测试剂组分：2×SYBR GREEN I预混反应液、引物RPRM‑F与RPRM‑R、甲基化阳性对照质粒SM及非甲基化阳性对照质粒SU；所述DNA转化试剂组分中，重亚硫酸盐转化反应液含5摩尔/升NaHSO3、12.5wt.% 乙二醇二甲醚，pH 5.0；所述DNA纯化试剂组分中，结合缓冲液含6摩尔/升盐酸胍；漂洗缓冲液含10毫摩尔/升Tris‑HCl，pH 6.8，体积分数80%乙醇；脱硫缓冲液含200毫摩尔/升NaOH，100毫摩尔/升NaCl，体积分数30%乙醇，体积分数5%甘油；洗脱缓冲液含10毫摩尔/升Tris‑HCl，1毫摩尔/升EDTA，pH 8.0；所述的引物RPRM‑F为：5’‑GTTTTAGAAGAGTTTAGTTGTTG‑3’；RPRM‑R为5’‑CTACTATTAACCAAAAACAAAC‑3’。