[发明专利]一种岩黄连的离体保存方法

摘要

本发明公开了一种岩黄连的离体保存方法，包括岩黄连的组培两步成苗，再利用组培两步成苗得到的具有4~6片叶的试管苗，接种到保存培养基进行离体保存，本发明保存培养基为1/2MS+PPP3331.0mg/l+AC0.3%+蔗糖4.5%+琼脂0.4%。培养基的pH值为5.8，温度为21±1°C，光照强度1400~1600lx，光照时间为8~10小时/天。利用本发明的方法可在短期内提供大量岩黄连的优质种苗，同时减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、生产成本降低，并且，有效解决了岩黄连种质资源保存及规模化育苗问题。

主权项

1.一种岩黄连的离体保存方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）不定芽诱导培养：取岩黄连茎尖作为外植体，在75%乙醇中浸泡30~45s，无菌水冲洗2~3次，投入添加2滴吐温的0.1%升汞4min，再用无菌水冲洗2~3次，再次投入添加2滴吐温的0.1%升汞4min，最后用无菌水冲洗2~3次后剪切为0.5~1.0cm长接种在诱导培养基上，培养10~14天，茎尖分化形成嫩黄绿色丛生芽；（2）丛生芽壮苗生根培养：经25~35天，丛生芽长至2~3cm，转入壮苗生根培养基培养1个月后，长成具根和4~6片叶的试管苗；（3）试管苗离体保存：将由丛生芽分化产生的具有4~6片叶的试管苗，接种到保存培养基进行离体保存；步骤（1）中所述的诱导培养基为：MS+6‑BA1.5mg/l+NAA0.5 mg/l +KT0.4mg/l+蔗糖2.5% +琼脂0.4%；所述培养基的pH值为5.8，培养温度为24~28°C，光照强度1400~2000lx，光照时间为12~14小时/天；步骤（2）中所述的壮苗生根培养基为：MS+IAA0.6mg/l+6‑BA0.3mg/l+ABT 0.5 mg/l +AC0.5%+蔗糖3.5%+琼脂0.4%；所述培养基的pH值为5.8，温度为22~25°C，光照强度2600~2800lx，光照时间为12~14小时/天；步骤（3）中所述的保存培养基为1/2MS+ PPP3331.0mg/l +AC0.3%+蔗糖4.5%+琼脂0.4%；所述培养基的pH值为5.8，温度为21±1°C，光照强度1200~1600lx，光照时间为6~8小时/天。