[发明专利]普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法

摘要

一种普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，属微生物菌种选育技术领域，它通过将经诱变处理的普通生酮基古龙酸菌于固体培养基平板上培养、并在固体培养基中添加一定剂量的指示剂，实现对普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的简便、快速鉴别；通过设计将挑取的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株接种于种液培养基中培养、并在种液培养基中添加一定剂量的指示剂，实现对挑取的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的简便、快速确认，再与离心管组培养技术结合，在满足了普通生酮基古龙酸菌单菌落接种培养和检测过程需要独立进行无菌操作要求的同时，又取得了批量培养的效果，从而达到快速、便捷、准确、高通量的筛选目的。

主权项

一种普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)以普通生酮基古龙酸菌为出发菌株进行诱变处理，获取经诱变处理的菌体悬浮液；(2)将经过诱变处理的菌体悬浮液稀释后涂布于含有一定剂量指示剂的鉴别用固体培养基平板上，31±3℃静置培养48～96h；(3)从鉴别用固体培养基平板上生长出的普通生酮基古龙酸菌单菌落中挑取在静置培养期内周围培养基出现变色圈且颜色由蓝绿变为黄色的单菌落，分别接种于一支装有含有一定剂量指示剂的鉴别用种液培养基的离心管中，每N支离心管组成一个离心管组，作为一个培养单元置于摇床中，31±3℃振荡培养，期间根据离心管中种液的颜色变化，挑取在较短时间内颜色由蓝绿变为黄色的离心管中种液作为高产酸种液；(4)将挑取的高产酸种液稀释后涂布于分离培养基平板上，31±3℃静置培养48～72h，挑取饱满个大的单菌落进行扩大培养，即得到纯化高产的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株；所述鉴别用固体培养基的组成为：山梨糖10～20g/L、酵母膏2～6g/L、玉米浆2～6g/L、蛋白胨5～10g/L、尿素0.5～2g/L、MgSO₄·7H₂O 0.05～0.2g/L、KH₂PO₄ 0.5～2g/L、CaCO₃ 0.5～2g/L、指示剂0.01～0.1g/L、琼脂10～25g/L，pH 7.0～7.5；所述鉴别用种液培养基的组成为：山梨糖10～20g/L、酵母膏2～6g/L、玉米浆2～6g/L、蛋白胨5～10g/L、尿素0.5～2g/L、MgSO₄·7H₂O 0.05～0.2g/L、KH₂PO₄ 0.5～2g/L、指示剂0.005～0.05g/L，pH 6.8～7.2；所述鉴别用固体培养基和鉴别用种液培养基中加入的指示剂是溴百里酚蓝，或加有适量溴甲酚紫的溴百里酚蓝、溴甲酚紫混合物，或加有适量甲基红的溴百里酚蓝、甲基红混合物，或加有适量溴甲酚紫和甲基红的溴百里酚蓝、溴甲酚紫、甲基红混合物。