[发明专利]一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法

摘要

本发明提供了一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法，所述方法包括：1)收集表达铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的菌体；2)将步骤1)收集的菌体破菌，并离心，收集上清；3)将步骤2)得到的上清通过GST亲和层析进行初纯化；4)将步骤3)处理后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化；5)将步骤4)纯化后的重组蛋白Vac33进行G25层析柱纯化；6)将步骤5)纯化后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化。本发明的纯化方法工艺简单，所获得目标蛋白纯度高，容易放大、重复性好，回收率较好。

主权项

1.一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法，其特征在于，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述方法包括：1)收集表达铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的菌体；2)将步骤1)收集的菌体破菌，并离心，收集上清；3)将步骤2)得到的上清通过GST亲和层析进行初纯化；其中，在所述亲和层析中A液进行洗脱，使用Prescission Protease酶进行酶切；4)将步骤3)处理后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化；其中，使用A液平衡层析系统及Q HP层析柱，使用B液线性梯度洗脱；5)将步骤4)纯化后的重组蛋白Vac33进行G25层析柱纯化；其中，采用C液平衡G25层析系统及层析柱，分离纯化重组蛋白，置换缓冲液；6)将步骤5)纯化后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化，加入0.1％Triton X‑100混匀，采用D液平衡层析系统及Q HP层析柱,去除杂质；其中，A液为pH7.0‑7.5的20mM Na₂HPO₄‑NaH₂PO₄缓冲液，B液为pH7.0‑7.5的含1M NaCl的20mM Na₂HPO₄‑NaH₂PO₄缓冲液；C液为pH6.0的含10mM L‑组氨酸，0.9％NaCl的溶液；D液为pH6.0的10mM L‑组氨酸，0.9％NaCl，0.1％Triton X‑100溶液。