[发明专利]齿瓣石斛均一多糖的分离纯化及一级结构鉴定方法

摘要

由于齿瓣石斛多糖粘性高，高活性多糖段分子量大，所以在其分离纯化以及结构解析方面存在一定难度。为此本发明公开了一种分离提纯齿瓣石斛均一多糖的方法，先用分步醇沉方法进行分离，然后经凝胶柱纯化，能够得到纯净的齿瓣石斛的均一多糖。另外，本发明还采用多光谱解析鉴定了齿瓣石斛均一多糖的骨架结构，能够对该多糖的一级结构准确鉴定，明确齿瓣石斛中的主要多糖为乙酰基葡甘露聚糖。

主权项

1.一种分离提纯齿瓣石斛均一多糖的方法，其特征在于将水提醇沉粗多糖先用分步醇沉方法进行分离，然后经凝胶柱纯化，得到齿瓣石斛的均一多糖；其中，采用分步醇沉方法进行分离包括：将粗多糖复溶于水，加酒精至50％进行乙醇醇沉，得到沉淀物，将该沉淀物去除，继续加酒精至体系酒精70％，得到絮状沉淀，该絮状沉淀为50‑70％醇沉粗多糖片段；凝胶柱纯化包括：将50‑70％醇沉粗多糖片段复溶于水，用凝胶柱进行纯化，用硫酸苯酚法跟踪监测收集，蒸发浓缩，透析，冷冻干燥，得到凝胶柱分离纯化过的均一多糖；通过核磁分析推断所提纯齿瓣石斛均一多糖的糖苷键→4)‑man‑(1→，→4)‑Glc‑(1→和→4)‑2‑o‑acetyl‑man‑(1→的比值为：1.46:1.74:1.00，齿瓣石斛中的主要多糖为乙酰基葡甘露聚糖；所述均一多糖的分子量为1.94×10⁵Da；其单糖摩尔比组成为：甘露糖:葡萄糖＝0.77:0.23。