[发明专利]一种快速检测猪瘟病毒/猪繁殖与呼吸综合征病毒/猪伪狂犬病毒/猪细小病毒的试剂盒

摘要

本发明涉及一种快速检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒试剂盒，特别是涉及一种利用多重实时荧光聚合酶链式反应技术同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)。本试剂盒主要包括RT‑PCR反应液、引物探针混合液、RT‑PCR反应酶系、DEPC H₂O，以及分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。由于本试剂盒通过多种荧光通道分别检测的方式，应用一步法实时荧光PCR反应模式，能准确快速检测并鉴别出猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒，可广泛应用于猪繁殖障碍性疾病临床早期诊断、口岸检验检疫、疫情防控、及科学研究等多个领域。

主权项

1.一种快速检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒试剂盒，包括：1)RT‑PCR反应液、引物探针混合液、RT‑PCR反应酶系、DEPCH₂O，阴性质控品、阳性质控品和2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中引物探针混合液由四种病毒特异性的正、反向引物及特异性的探针组成，其特征在于：1)猪瘟病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑ATGCAGATGGTGTGGCTTYG‑3’和5’‑AAGCATCATGACTCCCCYC‑3’，猪瘟病毒特异性探针的序列是5’‑AGCCYGACGGACTCCCRCACTACC‑3’，探针的5’端和3’端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；2)猪繁殖与呼吸综合征病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑TTGTGTCTGTCGTCGATCCA‑3’和5’‑CGTMGGCAAACTAAACTCCA‑3’，猪繁殖与呼吸综合征病毒特异性探针的序列是5’‑TTCAATCAGGGCGCTGGRACTTGTG‑3’，探针的5’端和3’端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1；3)猪伪狂犬病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑GAGCGACGACAGCTTCAAG‑3’和5’‑CGTTCTTGCGGTACCAGTAG‑3’，猪伪狂犬病毒特异性探针的序列是5’‑CGTGGACGTGATGCGATTCCTGACG‑3’，探针的5’端和3’端分别结合有荧光发生基团TexasRed和荧光淬灭基团BHQ2；和4)猪细小病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑AATTTCAATACTTGGGGGAGG‑3’和5’‑ATGTATTCTTTTGTATGTTTCGTGTT‑3’，猪细小病毒特异性探针的序列是5’‑CACTGCACACGCATCAAGACTCATACATC‑3’，探针的5’端和3’端分别结合有荧光发生基团Cy5和荧光淬灭基团BHQ3。