[发明专利]核酸提取用磁性微珠的制备方法

摘要

核酸提取用磁性微珠的制备方法，涉及磁性微珠的制备方法。本发明是要解决现有生物磁珠粒径大，表面能小，核酸吸附效率低的问题。方法1：一、制备Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠；二、磁性微珠洗涤；三、制备表面键合环氧基的磁性微珠；四、制备表面键合二醇基的磁性微珠。方法2：一、制备Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠；二、磁性微珠洗涤；三、制备表面键合环氧基的磁性微珠；四、制备表面包覆亚氨基二乙酸的磁性微珠。本发明方法制备的磁珠粒径小，为纳米级；提高了磁珠的表面能，延长磁珠在提取液中的悬浮时间，能够与目标提取物更有效地接触，提高目标提取物的提取率。本发明用于制备核酸提取用磁性微珠。

主权项

1.核酸提取用磁性微珠的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、向30mL、0.5mol/L柠檬酸溶液中加入5g纳米Fe₃O₄，调节溶液的pH值至5.5，在氮气保护下搅拌，然后将纳米Fe₃O₄取出，用丙酮洗涤，再将纳米Fe₃O₄放入去离子水中超声波分散，之后加入无水乙醇，形成乙醇‑水体体系，并调节溶液的pH值至6，然后向含有纳米Fe₃O₄的乙醇‑水体溶液滴加正硅酸乙酯，纳米Fe₃O₄与正硅酸乙酯的质量比为1:1，升温至60～80℃，搅拌反应8h，最后将纳米Fe₃O₄依次用去离子水和无水乙醇冲洗，干燥箱干燥，得到Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠；纳米Fe₃O₄的粒径为13nm；二、将步骤一制备的Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠加入乙醇‑水溶液中，再分别加入质量浓度为28％的浓氨水和TEOS，于室温振荡反应3h，然后取出磁性微珠用去离子水洗涤至中性，再依次用无水乙醇和丙酮洗涤，之后于60℃真空干燥，再将磁性微珠放入质量浓度为35％的稀盐酸溶液中浸泡，然后重新用去离子水洗涤至中性，再依次用无水乙醇和丙酮洗涤；三、将步骤二洗涤后的磁性微珠分散于无水甲苯中，在氮气保护下加入环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷试剂，回流反应，得到改性磁珠，将所得改性磁珠依次用甲苯、甲醇、甲醇水溶液和甲醇洗涤并抽干，烘干后得到表面键合环氧基的磁性微珠；四、将烘干得到表面键合环氧基的磁性微珠分散于pH值为3的质量浓度为35％的稀盐酸溶液中，在100℃下加热回流2h，产物以去离子水洗涤至中性后，再分别以无水乙醇和丙酮洗涤，过滤收集磁性微珠，烘干得到表面键合二醇基的磁性微珠；其中步骤二所述乙醇‑水溶液中无水乙醇和水的体积比为5:1；步骤三中甲醇水溶液的体积浓度为50％；步骤四中表面键合环氧基的磁性微珠的质量与稀盐酸溶液的体积比为1g:10mL。