[发明专利]一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法

摘要

本发明涉及一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法，属于蛋白纯化领域，包括以下步骤1)破碎表达重组人胰岛素原融合蛋白的大肠杆菌菌体，收集包涵体；2)洗涤包涵体，然后使包涵体溶解、融合蛋白变性；3)蛋白复性步骤；本方法不需预先的蛋白纯化步骤，直接进行蛋白复性，最后收获高浓度的具有天然结构的重组胰岛素原融合蛋白，克服现有技术中，蛋白复性后蛋白浓度低，易发生蛋白聚集沉淀的缺陷，复性率提高至80％‑90％，提高生产效率，适于工业化生产。

主权项

一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将表达重组人胰岛素原融合蛋白的大肠杆菌进行破碎，收集包涵体；2)使用包涵体洗涤液对于包涵体进行洗涤，所述包涵体洗涤液是含有终浓度50mM Tris‑HCl、2mM EDTA、质量比1％Triton‑X100和3M尿素的溶液，该包涵体洗涤液的pH为9.0‑9.5；3)去除洗涤液后，在包涵体里加入变性剂，所述包涵体变性剂是含有终浓度50mM的Tris‑HCl、终浓度2mM的EDTA和终浓度8M的尿素的溶液，该包涵体变性剂的pH为9.0‑9.5；4)加入还原剂，所述还原剂为巯基还原剂，使用终浓度为5‑20mM，获得还原蛋白溶液；5)是将配好的复性缓冲液缓慢加入4)中的还原蛋白溶液中，轻微搅拌，进行重组人胰岛素原融合蛋白的复性，各组分终浓度分别为0.8M的尿素、1mM的氧化型谷胱甘肽、1mM的还原型谷胱甘肽、2mM的EDTA和终浓度2mM的β‑巯基乙醇，调pH9.0‑9.5，得到优化的复性蛋白溶液。