[发明专利]一种从竹笋中提取活性化合物的方法及其应用

摘要

本发明公开了一种从竹笋中提取活性化合物的方法，包括将竹笋粉碎，经乙醇水溶液回流提取，浓缩至无乙醇后，得溶液，石油醚脱脂，再依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，萃取液浓缩后进行柱层析分离，收集溶液，溶液浓缩干燥后得到样品并进行结构鉴定；本发明制备得到的化合物具有一定的酪氨酸酶抑制活性，能够有效预防和治疗黑色素合成异常导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病症，可用于制备治疗此类疾病的药物。

主权项

1.一种从竹笋中提取活性化合物的方法，其特征在于，包含以下步骤：（1）取竹笋粉碎，用竹笋质量5～10倍的乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流2～3小时，过滤，合并滤液；（2）将步骤（1）滤液浓缩至无乙醇后，离心分离去沉淀，得溶液；（3）将步骤（2）溶液用石油醚脱脂，然后依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取；（4）将乙酸乙酯萃取部分浓缩成浸膏，用正相硅胶柱分离，采用体积比30: 1～1:1的氯仿‑甲醇系统梯度洗脱；收集体积比20:1的氯仿‑甲醇洗脱液，浓缩后采用硅胶柱层析，石油醚‑丙酮溶液洗脱，洗脱液浓缩，在浓缩过程中有固体小颗粒析出，用丙酮溶解，加入石油醚进行重结晶，得到化合物对羟基苯甲醛，其中石油醚‑丙酮溶液为石油醚和丙酮按体积比8:1混合制得；收集体积比15:1的氯仿‑甲醇洗脱液，浓缩后采用正相硅胶柱层析，石油醚‑丙酮溶液梯度洗脱，收集体积比9:1～7:1的石油醚‑丙酮洗脱液浓缩制得对羟基苯甲酸甲酯粗品，收集体积比6:1～3:1的石油醚‑丙酮洗脱液浓缩制得对羟基亚苄基丙酮粗品，将两个粗品分别经凝胶柱层析，甲醇为洗脱溶剂，分别收集洗脱液浓缩得到对羟基苯甲酸甲酯和对羟基亚苄基丙酮；收集体积比8:1的氯仿‑甲醇洗脱液，浓缩后经反相硅胶柱层析，用体积比为30:70～60:40的甲醇‑水溶液梯度洗脱，将体积比为50:50的洗脱液经正相硅胶柱层析，体积比3:1的石油醚‑丙酮混合液洗脱，洗脱液结晶，得到化合物对羟基苯甲酸；（5）将正丁醇萃取部分浓缩成浸膏，水溶解后加入大孔树脂柱吸附，用质量百分比浓度为40～60%的乙醇溶液洗脱，HPLC跟踪分析，收集含2R‑ β ‑ D ‑吡喃葡萄糖基‑2‑对羟基苯乙腈成分的洗脱液，浓缩后拌入硅胶，常规干燥，过正相硅胶柱进行柱层析，以体积比5:1～1:1的氯仿‑甲醇混合液进行洗脱，得到2R‑ β ‑ D ‑吡喃葡萄糖基‑2‑对羟基苯乙腈的粗品，在重结晶溶剂中加热溶解至饱和，置于低温环境下进行重结晶，得到2R‑ β ‑ D ‑吡喃葡萄糖基‑2‑对羟基苯乙腈。