[发明专利]完全不动精子的生育力保存方法

摘要

本发明公开了一种完全不动精子的生育力保存方法，由以下步骤构成：①完全不动精子冷冻方法：收集完全不动精子后，取小部分出来，用激光鉴定如有存活的精子即判为可冷冻保存，若无存活精子，则废弃；②完全不动精子冷冻前、后精子存活状态的评估：如果激光射击后，精子尾部立即出现明显的卷尾现象，则判定为存活精子，对激光射击无反应不发生卷尾的为死精子；本发明首次证明完全不运动精子是可以冷冻保存的，冷冻后这些精子具有正常的体外受精能力；同时，建立了高效冷冻保存这部分特殊群体生育力的方法，用激光筛选存活但完全不动的冷冻精子进行卵胞浆内单精子注射后能获得与新鲜不动精子相似的受精率。国内外均未见相关的报道。

主权项

一种完全不动精子的生育力保存方法，其特征是：由以下步骤构成：①完全不动精子冷冻方法：收集完全不动精子后，取小部分出来，用激光鉴定如有存活的精子即判为可冷冻保存，若无存活精子，则废弃；将剩余精液吸至100～200μL(微升)，放入专用微量精子冷冻管内，直接用低转速的离心机离心；离心后去除上清液，然后再加入与精子沉淀1∶1体积的精子冷冻液，混匀，使最终悬液的总体积为10μL；将装有精子悬液的冷冻管置于距液氮面2‑3cm处，熏蒸3～5min，然后直接投入液氮中冷冻保存；解冻时，直接将冷冻管投入到预热好的37℃的水浴中，放置10min；最后将精子悬液吸出，放置于培养皿中，加入少许培养液稀释后备ICSI即卵胞浆内单精子注射；②完全不动精子冷冻前、后精子存活状态的评估：将获取的不动精子加入到Quinn’s‑1020即受精液操作皿中，在视野下选择形态较好的精子，在精子尾部靠近尾巴尖端处，用1.48μm(微米)的二极管激光束照射精子尾部中下段，照射时间为2ms(毫秒)，如果激光射击后，精子尾部立即出现明显的卷尾现象，则判定为存活精子，对激光射击无反应不发生卷尾的为死精子；冷冻前和复苏后分别计算不动精子的存活率，以冷冻后的存活指数，来评价完全不活动精子的冷冻效果；对完全不动精子的微量冷冻，其最终精子冷冻悬液的总体积仅为10μL；上述的对完全不动精子冷冻前、冷冻后的存活情况应用激光进行鉴定。