[发明专利]一种以棉花幼胚为受体接种TRV病毒诱导基因沉默方法有效
| 申请号： | 201610157678.X | 申请日： | 2016-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN105647966B | 公开（公告）日： | 2019-05-28 |
| 发明（设计）人： | 张景霞;张军;王芙蓉;陈煜;张传云;刘国栋 | 申请（专利权）人： | 山东棉花研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/83 | 分类号： | C12N15/83 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种以棉花幼胚为受体接种TRV病毒诱导内源基因沉默的方法，步骤如下：(1)将目的基因插入TRV病毒载体中，制备重组载体，然后转化农杆菌，制得转化后的农杆菌；(2)取棉花种子，经脱绒、灭菌后，经萌发后去除萌发种子的内、外皮，幼胚放入含有赤霉素的MS液体培养基中，制得待侵染胚；(3)培养转化后的农杆菌，制得农杆菌侵染液，制得侵染液，将待侵染胚浸入侵染液中，暗培养，经共培养后，栽种到灭菌的营养土中，进行营养土培养，即可。本发明首次以棉花幼胚作为受体接种TRV病毒，不对幼胚进行破坏性处理，不产生任何损伤，克服了接种病毒时对棉苗造成机械损伤的缺点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 棉花 受体 接种 trv 病毒 诱导 基因 沉默 方法 | ||
【主权项】：
1.一种以棉花幼胚为受体的TRV病毒诱导棉花基因沉默的方法，其特征在于，步骤如下： (1)将目的基因插入TRV病毒载体中，制备重组载体，然后转化农杆菌，制得转化后的农杆菌；(2)取棉花种子，经脱绒、灭菌后，经萌发后去除萌发种子的内、外皮，幼胚放入含有2.5～3.5mg/LGA3(赤霉素)的MS液体培养基中，25～30℃，120rpm/min暗培养6～10h，制得待侵染胚；(3)培养步骤(1)制得的转化后的农杆菌，制得农杆菌侵染液，然后加入农杆菌侵染液质量百分比0.15～0.25％的表面活性剂，制得侵染液，将步骤(2)制得的待侵染胚浸入侵染液中，22～28℃，100～150rpm/min，暗培养20～40分钟，去除多余侵染液，经共培养后，栽种到灭菌的营养土中，进行营养土培养，即可。
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