[发明专利]一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法

摘要

本发明涉及细胞生物学技术领域，特别涉及一种裸鼹鼠小胶质细胞的分离纯化和培养方法。本发明综合使用多种培养基从新生裸鼹鼠大脑皮层分离并纯化培养小胶质细胞，摸索出了适于变温的啮齿类哺乳动物裸鼹鼠小胶质细胞的合理培养方法。本发明方法能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的裸鼹鼠小胶质细胞，低氧条件下的培养能够保证这种细胞在离体环境中依然能够保持在体状态下的生物学特性，从而便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究裸鼹鼠小胶质细胞的特殊生理功能，从而为探索其中的生物学机制并应用于临床相关领域提供重要的理论依据。

主权项

1.一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，包括以下步骤：A、收集裸鼹鼠大脑皮层混合细胞：分离出生1‑7天裸鼹鼠大脑皮层组织，将组织剪碎，加入组织消化液混匀之后，将其放入三气培养箱中消化；然后加入混合神经细胞培养基终止消化，离心去除上清之后，将细胞沉淀重悬并吹打成单细胞悬液并种于培养瓶中；B、裸鼹鼠大脑皮层混合细胞的培养：将步骤A得到的混合细胞，用混合神经细胞培养基于三气培养箱中培养30‑‑45天；自混合细胞接种之后，每10天采取半量换液的方法更换混合神经细胞培养基；C、裸鼹鼠小胶质细胞的分离及纯化培养：将步骤B中培养的混合细胞恒温震荡培养4小时，震荡培养过程中保持培养瓶口旋紧以减少瓶内外空气交换，恒温35±2℃，将震荡培养的细胞悬液置于未包被有左旋多聚赖氨酸的培养皿中使细胞贴壁10分钟以上，去除细胞上清，更换新鲜的混合神经细胞培养基中继续培养；待到对小胶质细胞功能研究时，提前20‑40分钟更换为小胶质细胞培养基于三气培养箱中进行培养；所述的小胶质细胞培养基，为添加体积百分数为2％B27的Neurobasal；所述的三气培养箱的参数设置为：温度控制在35±2℃，氧浓度为5％，二氧化碳浓度为5±1％，湿度为96±2％。