[发明专利]一种经无菌化处理的雨生红球藻的超低温保藏方法

摘要

本发明公开了一种经无菌化处理的雨生红球藻的超低温保藏方法，本发明提供的超低温保藏方法在保藏前进行了系统化的除菌工作，除菌后的雨生红球藻再经特异的低温保藏条件，使得解冻后的无菌雨生红球藻具有良好的复苏存活率，可达66.13%。利用本发明提供的方法，除菌后的藻液在LB平板上无细菌菌落出现，且经3次传代培养后，再次用LB平板进行无菌检测，也无细菌菌落出现，除菌后的藻株不易老化，起到了保持种质遗传稳定性、便于长期保存的效果。

主权项

一种经无菌化处理的雨生红球藻的超低温保藏方法，包括：1）在处于指数生长后期的雨生红球藻藻液中加入终浓度为100～500ug/ml的氨苄青霉素，培养1～3天，继续加入终浓度为1～10ug/ml的庆大霉素，培养1～3天，继续加入终浓度为1～10ug/ml的卡那霉素，再培养2天；取经无菌化处理后的藻液涂布于LB平板上，初步认定无菌后，再经3次传代培养，彻底消除残留抗生素的影响，再次用LB平板进行无菌检测，经检测无菌的雨生红球藻用于超低温保藏；2）将雨生红球藻厚壁孢子液和甘油按体积比为1:1进行混合，使得混合液中细胞密度的终浓度为1.5×10⁵~5×10⁵个/ml，甘油的终浓度为5~25%，室温静置5~20min，然后放入程序降温仪中，0.5℃/min～5℃/min，预冻至‑30℃～‑80℃，在此温度保持30min～120min，然后放入液氮罐中保存。