[发明专利]一种尖吻蝮蛇凝血酶及其制备方法

摘要

本发明公开了一种高活性尖吻蝮凝血酶的制备方法。该方法将蛇毒粗品经超滤膜超滤后通过阴离子柱层析，以磷酸缓冲液洗脱后，再通过分子筛凝胶柱除热源与脱盐，最终得到高活性、高纯度的凝血酶。本发明方法与现有技术相比具有以下优点：该方法适合大规模生产、操作简单、效率高；制备的尖吻蝮属凝血酶产品产率高达8％，纯度高达99％以上，比活力不低于180U/mg。

主权项

1.一种尖吻蝮蛇凝血酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)粗品澄清：以浓度为0.01M、pH值为6.5‑7.1的磷酸缓冲液，溶解尖吻蝮蛇蛇毒粗品，制成蛇毒溶液，蛇毒溶液经孔径0.45μm的微滤膜过滤，收集滤液；(2)超滤除杂：将所得滤液经孔径10NMWC超滤膜过滤，收集滤液；(3)将步骤(2)所得滤液用DEAE‑Sepharose Fast Flow层析柱进行第一次层析，用含有0.05mol/L NaCl，浓度为0.01M，pH值为6.2‑6.8的磷酸缓冲液洗脱，收集出峰组分，以孔径为10NMWC超滤膜超滤浓缩，收集滤液；(4)将步骤(3)所得滤液用DEAE‑Sepharose Fast Flow层析柱进行第二次层析，再分别用含0.03mol/L和0.1mol/L NaCl，浓度为0.01M，pH值为7.2‑7.8的磷酸缓冲液依次洗脱，收集0.1mol/L的洗脱峰流出液，以孔径10NMWC超滤膜超滤浓缩，收集滤液；(5)除热原：将步骤(4)所得滤液用Superdex‑75pg层析柱，用pH值为7.2‑7.8的0.01M磷酸缓冲液层析洗脱，收集出峰组分；(6)脱盐：将步骤(5)所得滤液用Sepadex‑G25层析柱，用注射用水洗脱，对已除热原的上述组分进行脱盐，得到尖吻蝮蛇凝血酶。