[发明专利]一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法

摘要

本发明涉及一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法。该方法主要步骤是：分别提取对照与待检烟草品种的基因组总DNA，采用最新测序技术对其进行适当深度的全基因组测序，基于烟草基因组参考序列利用生物信息学手段对它们进行序列拼接、组装与全基因组序列比较，统计二者碱基差异，计算出待检烟草品种相对于对照烟草品种的纯度百分比。本发明方法不受环境条件和季节影响，结果准确、可靠，可从最小遗传单位单碱基变异水平上准确鉴定烟草品种的纯度，可用于烟草品种亲本提纯与真伪鉴定，对保证烟叶生产用种安全、维护烟农经济利益及有效解决烟草品种知识产权争议和纠纷意义重大。

主权项

一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法，其特征在于具体步骤依次如下：A、将对照与待检烟草品种种子分别播种于已标识的营养钵中，置于光照培养架上培养，24小时内辅助灯光设计为开灯8~10小时，关灯14~16小时，室内温度保持在25~28 ℃，根据营养钵中营养土干湿情况补充水分；B、待烟苗长出7~10片真叶后，随机选取数量相等的对照与待检烟草品种烟苗，每株烟苗采集1~3片真叶，采用CTAB小样法提取和纯化基因组总DNA，将每份DNA浓度调至相同，为100~200 ng/μl，对照烟草品种各烟苗DNA等量混合构建成为对照DNA混合池，待检烟草品种各烟苗DNA等量混合构建成为待检DNA混合池，‑20 ℃保存备用；C、利用基因组测序技术对步骤B中的对照和待检烟草品种DNA混合池分别进行40~50倍深度的重测序，获得重测序数据，根据烟草基因组参考序列采用生物信息学方法进行基因组序列拼接与组装，获得对照和待检烟草品种全基因组序列；D、利用生物信息学方法比较对照与待检烟草品种全基因组序列的碱基差异，计算出待检烟草品种纯度，以此作为判断待检烟草品种纯度高低的依据。