[发明专利]用于鱼类肠道益生菌候选菌株耐受力检测的样品前处理方法

摘要

本发明公开了一种用于鱼类肠道益生菌候选菌株耐受力检测的样品前处理方法，利用鱼类胆囊胆汁代替市售生化试剂对鱼类肠道益生菌候选菌株进行处理，用于检测其耐受力。鱼类禁食后，胆汁储存于胆囊，胆囊胆汁取出进行稀释后可直接使用，也可保存于‑20℃冰箱备用，能够节省配制不同生化试剂溶液的时间，而且利用鱼类胆囊胆汁液处理待测菌株的方法能够更准确模拟待测菌株在肠道内的生存状态。本发明中的样品处理方法取材方便，操作简单易行，经济环保，结果稳定可靠，可适用于不同鱼类肠道益生菌或候选菌株的耐受力检测。

主权项

一种用于鱼类肠道益生菌候选菌株耐受力检测的样品前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将鱼置于流水养殖系统中，禁食48‑96小时，挑取健康鱼，体表消毒后，掀开体壁，暴露鱼的胆囊，用无菌磷酸盐缓冲液冲洗胆囊部位的血液、脂肪；2)用一次性注射器针头刺破胆囊，抽取胆汁3‑10ml，然后用无菌磷酸盐缓冲液稀释胆汁至体积百分比浓度为5‑20％，保存于‑20℃冰箱备用；3)取100μL待测菌株菌液加入到10ml液体培养基中，在30‑37℃恒温培养箱中培养48小时，然后将菌液OD值在625nm波长调节至0.1；4)取500μL的菌液，4000rpm，4℃，离心5min，收集菌体，加入500μL步骤2)制得的含有体积百分比浓度为5‑20％鱼胆汁的磷酸盐缓冲液，在30‑37℃恒温培养箱中孵育1‑2小时。