[发明专利]2型糖尿病肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法

摘要

本发明公开了一种2型糖尿病肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，包括以下步骤：样品收集；样品预处理；纳米磁珠活化；唾液样品上样；纳米磁珠洗脱；数据采集；数据分析；建立诊断模型。本发明采用液态芯片联合MALDI技术检测2型糖尿病肾虚证患者的唾液蛋白质指纹图谱，从唾液蛋白质中筛选出9个有极显著的统计学意义的差异蛋白峰(P<0.001)，选择质荷比为5744.34、2410.88两个差异蛋白质峰进行建模，识别率为91.7％，预测能力95.6％。本发明构建的模型能够正确地区分2型糖尿病肾虚证患者及不同的中医证型的患者，为临床疾病诊断及中医辩证客观化开辟了新途径，开拓了中医微观辩证学的研究新思路。

主权项

一种2型糖尿病肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品收集；(2)样品预处理：收集的唾液样品在2h内置于转速3000r/min的4℃低温离心机离心10min，并按照50μl/管分装于冻存管，置于‑80℃冰箱冷冻保存备用；(3)纳米磁珠活化；(4)唾液样品上样：④取5μl唾液样品，加10μl的U9裂解液，混合孵育30min后，加入185μl的Wash Buffer稀释；⑤向含有活化磁珠的PCR管中加入100μl处理好的唾液样品，室温孵育30min，置于磁铁上孵育1min，去除上清液；⑥再往管中加入100μl的Wash Buffer洗脱5min，然后将PCR管置于磁铁上孵育1min，去除上清液；⑦重复步骤⑥一次；(5)纳米磁珠洗脱：每个PCR管中加入10μl的Elution Buffer，洗脱5min，放置于磁铁上孵育1min，取5μl上清液移至另一个PCR管中，并加入5μl的CHCA饱和溶液充分混匀，吸取2μl混合溶液加样到Au/Steel芯片上，风干，然后上机读取芯片，收集数据；(6)数据采集；(7)数据分析；(8)建立诊断模型：采用决策树算法计算出多个变量变化对两样本的判别价值，确定诊断模型。