[发明专利]一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法

摘要

本发明属于生物育种领域，专用于高山杜鹃“红粉佳人”染色体倍性育种，特别是涉及一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法，利用高山杜鹃“红粉佳人”外植体诱导产生愈伤组织，用化学试剂秋水仙素处理愈伤组织使染色体加倍，再转接到分化培养基中进行培养，诱导不定芽产生，将不定芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，再将壮苗接种到生根培养基中进行生根培养、炼苗移栽，在显微镜下观察染色体，筛选出加倍后的植株种苗。本发明首次提出观赏植物高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍的方法。本发明培育出的多倍体高山杜鹃“红粉佳人”，有效提高高山杜鹃“红粉佳人”的观赏价值。

主权项

一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将高山杜鹃“红粉佳人”外植体消毒后转接到愈伤组织培养基中进行培养，诱导产生愈伤组织；所述的外植体消毒的方法：用质量浓度75%的酒精处理外植体30S，用无菌水冲洗4‑5遍，再用质量浓度0.1%的氯化汞处理1分钟；所述的愈伤组织培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基中添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、2‑ip 6mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，暗培养，培养时间30天；其中1升WPM基本培养基成分为：大量元素：NH4NO3 400mg；(NH4)2SO4 132mg；MgSO4·7H2O 370mg；KH2PO4 170mg；KNO3 400mg；K2SO4 900mg；钙盐：CaCl2 96mg；Ca(NO3)2·4H2O 556mg；微量元素：H3BO3 6.2mg；MnSO4·H2O 22.3mg；Na2MoO4·2H2O 0.25mg；CuSO4·5H2O 0.025mg；ZnSO4·7H2O 8.6mg；铁盐：Na2‑EDTA 37.3mg；FeSO4·7H2O 27.8mg；维生素：肌醇100mg；烟酸0.5mg；盐酸吡多醇0.5mg；盐酸硫胺素0.5mg；甘氨酸2mg；（2）使用化学试剂秋水仙素处理愈伤组织，实现染色体加倍；具体过程为：愈伤组织经过质量浓度0.05%的秋水仙素处理24h，用无菌水冲洗4次；（3）选择质地呈颗粒状，颜色发红色的愈伤组织，转接到不定芽培养基中进行培养；所述的不定芽培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基添加蔗糖30g、琼脂6.5g、TDZ 0.1mg、2‑ip 1mg，定容水至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，光照强度3500Lux，培养时间45天；（4）将分化出的不定芽转接到增殖培养基中进行增殖培养；所述的增殖培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基中添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、2‑ip 3mg、NAA 0.5mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，光照强度3500Lux，培养时间60天；（5）经过增殖培养的健壮良好组培苗接种到生根培养基中进行生根培养；所述的生根培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基中，添加蔗糖20g、琼脂粉6.5g、活性炭1g、IBA 0.8mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4；其中WPM培养基中NH4NO3、(NH4)2SO4、MgSO4、7H2O、KH2PO4、KNO3、K2SO4量减少一半；培养温度22±2℃，光照强度3500Lux，培养时间90天；（6）选择根系长到2‑3cm的生根苗进行炼苗，用草炭土和珍珠岩配成的混合基质；（7）炼苗移栽后在显微镜下进行染色体数目观察，筛选出染色体加倍后的植株苗。