[发明专利]一种快速筛选天然产物活性成分的细胞膜磁性微球制备及其应用

摘要

一种快速筛选天然产物活性成分的细胞膜磁性微球制备及其应用，属于亲和色谱筛选天然产物活性成分领域。本发明采用细胞膜与磁性微球相结合构建细胞膜磁性微球，并利用此亲和材料结合天然产物中的活性物质(见摘要附图)。本发明从细胞获取细胞膜结构，并将该结构固定于磁性微球，制成就有筛选活性的细胞膜磁性微球，采用所建立的细胞膜磁性材料与色谱质谱联用技术结合能够快速筛选、鉴定天然产物中含有的活性物质。整个分离鉴定过程仅需细胞膜微球亲和结合以及色谱质谱鉴定两个步骤。同传统方法相比，本法具有分离鉴定周期短，快速高效的优点，同时克服了其他细胞膜色谱需装填色谱柱，对细胞膜消耗量大，分离鉴定周期长的缺欠。

主权项

一种快速筛选天然产物活性成分的细胞膜磁性微球制备及其应用，其特征在于包括如下步骤：(1)细胞膜悬液加入蛋白酶抑制剂后，用pH7‑8的低渗液重悬细胞。超声破碎细胞。在4‑10℃条件下，采用200‑1000×g离心5‑10min，取上清，再采用10000‑20000×g离心15‑30min，弃上清，取沉淀，采用5mM磷酸盐缓冲液(PBS)清洗沉淀3～5次，得到细胞膜。4℃贮存、备用。(2)采用磁力或离心的方法将磁性微球从保护液中吸出。(3)在振荡条件下，采用减压法将步骤1获得的细胞膜吸附于磁性微球表面，制备细胞膜磁性微球，将制备好的微球置于4‑10℃，恒温振荡2‑8h，使得细胞膜充分融合，即得。(4)采用水或乙醇热回流提取药材活性成分1‑3次，每次30min‑120min，合并提取液，放冷，滤过后，4℃保存，备用。(5)在37℃条件下，将细胞膜磁性微球与天然产物提取液共孵育10‑60min。采用磁力、离心力等将吸附了活性成分的细胞膜磁性微球从提取液中分离，再采用磷酸盐缓冲液洗去未结合的化合物，采用10％‑30％乙酸水溶液组成的解离液使活性化合物与细胞膜磁性微球表面的靶点解离，利用色谱质谱联用的方法测定解离液中的化合物组成。