[发明专利]干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法，其前处理工艺，主要包括样本前处理、衍生、复溶工序，同时采用多反应监测MRM扫描方式，该方法实现干血片中25羟基维生素D的高通量液相色谱串联质谱检测，解决传统液相色谱串联质谱方法样本量需求量量大、采样、运输不方便的问题，通过对检测技术的改进，实现干血片中25羟基维生素D的检测，检测者可在家自行采集，样本需求量减小，采样、运输方便。

主权项

干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样本前处理：用3/16打孔器打一个血斑样本到含内标溶液10μl的第一离心管中，加入500μl丙酮，超声提取30min后，涡旋30min得到提取液；将提取液转移到第二离心管中，60℃吹干；衍生：将100μl衍生剂加入到吹干后的残渣中，室温下反应1小时后加入80μl乙醇，涡旋5min，60℃吹干；复溶：将50μl 80％甲醇加入衍生吹干后的残渣中进行复溶，涡旋5min，以13000rpm的转速离心3min，取上层清液转移到内插管中，进样分析；(2)采用高效液相色谱串联质谱技术检测经上述处理的干血片样品中25羟基维生素D，其中采用的是多反应监测MRM扫描方式，所述色谱条件如下：流动相C为纯甲醇，流动相D为纯水，柱温30℃，检测时间为5min，进样量为20μl；采用梯度洗脱方式，洗脱参数见表1；表1为梯度洗脱参数25羟基维生素D3衍生物的保留时间为3.6min；25羟基维生素D2衍生物的保留时间为3.8min；所述多反应监测MRM质谱参数见表2，表2为质谱参数