[发明专利]一种利用大肠杆菌发酵生产胸苷磷酸化酶的方法有效
| 申请号： | 201610227380.1 | 申请日： | 2016-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN107287172B | 公开（公告）日： | 2021-02-02 |
| 发明（设计）人： | 丁雪峰 | 申请（专利权）人： | 南京诺云生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 张慧清 |
| 地址： | 210000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用大肠杆菌发酵生产胸苷磷酸化酶的方法，属于生物工程领域。本发明通过表达胸苷磷酸化酶突变体，能有效提高单位菌体的总酶活，可有效降低抗爱滋病药物中间体β‑胸苷的生产成本。只要一般的发酵车间（如氨基酸、维生素生产车间）即可进行投入生产，不需购置特殊设备，易于推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 大肠杆菌 发酵 生产 磷酸化酶 方法 | ||
【主权项】：
一种利用大肠杆菌发酵生产胸苷磷酸化酶的方法，其特征是：包括以下步骤：（1）挑取含有SEQ ID NO.3表达载体的大肠杆菌单菌落接种于高压灭菌后的一级培养基中，30℃，250rpm，过夜培养；（2）将步骤（1）获得的产品按照1:100的接种比例接入到高压灭菌后的二级培养基中，于30℃中培养至菌体OD值5‑6后，立即将其置于25℃中，震荡，250rpm培养1小时；（3）向步骤（2）获得的产品中加入IPTG至其终浓度为0.1mM，并于25℃，250rpm继续培养16小时；（4）将培养液于4℃条件下，12000g下离心20分钟，收集湿菌体，然后利用菌体进一步发酵生产胸苷磷酸化酶。
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