[发明专利]一种通过未成熟种子保存极小种群广西越桔后代的方法

摘要

本发明公开了一种通过未成熟种子保存极小种群广西越桔后代的方法，解决了浙江省极小种群广西越桔在自然条件下繁殖比较困难的问题。本发明在自然保护区收集广西越桔未成熟果实，表面消毒后剥取其未成熟种子及部分子房组织，通过组织培养技术来繁育广西越桔后代，短时间内获得数量较多的广西越桔无菌幼苗。本发明的优点是本发明采用的外植体为未成熟种子，利用人工培养基对其进行培养，能够改善在自然条件下，其种子繁殖不发达的缺陷，可在短期内获得较多的广西越桔植株。该方法可操作性强，简单实用，污染率低，对于极小种群的保存及其繁殖具有重要的意义。

主权项

一种通过未成熟种子保存极小种群广西越桔后代的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）采集广西越桔植株上表面呈现绿色、表皮坚硬的未成熟果实，消毒后，用解剖刀切开未成熟果实，剥取未成熟种子连同部分子房组织，接种到培育培养基上；于25°C黑暗条件下培养24 h，再在光照强度为20 μmol·m‑2·s‑1、光照时间为12小时/天的弱光照条件下培养，直到种子成熟；其中，培育培养基以WPM（Woody Plant Medium）为基本培养基，另外添加蔗糖、琼脂、活性炭、谷氨酰胺、酶水解酪蛋白，蔗糖、琼脂、活性炭、谷氨酰胺、酶水解酪蛋白的浓度分别为0.03 g/mL、0.012 g/mL、0.002g/mL、0.0004 g/mL、0.0005 g/mL，pH为5.0；（2）种子发育成熟后，将种子转移至萌发培养基上进行诱导萌发，培养条件：温度为25°C、光照强度为20 μmol·m‑2·s‑1、光照时间为12小时/天；（3）种子萌发后，将幼苗转移到生长培养基上进行壮苗培养，并且可以通过扩繁培养基诱导其腋芽生长，进行大量扩繁；壮苗后将植株转移至生根培养基上进行生根培养，培养条件：温度为25°C、光照强度为50 μmol·m‑2·s‑1、光照时间为12小时/天；（4）待植株生根后，将其炼苗后转移至营养土中栽培，栽培条件：温度为22°C、光照强度为50 μmol·m‑2·s‑1、光照时间为12小时/天。