[发明专利]长豇豆种质锈病抗性的离体鉴定方法及其使用的锈菌菌液

摘要

本发明涉及作物抗病育种技术领域，尤其涉及室内离体鉴定长豇豆种质材料锈病抗性的方法。一种长豇豆种质锈病抗性的离体鉴定方法，它采用经纯化的锈菌单一生理小种配置成一定浓度新鲜孢子悬浮液，在离体叶片上接种相同数量的菌液，在可控的环境下观察锈菌孢子的生长情况，根据孢子的生长状况评价植株的抗锈病能力。该技术操作简单，易于应用。

主权项

一种用于长豇豆种质锈病抗性的离体鉴定的锈菌菌液，其特征在于该锈菌菌液的制备方法如下：1)从田间采集感锈病的叶片，用含0.1％ Tween‑20的蒸馏水清洗病叶上的锈病孢子，镜检后调整孢子浓度至10²/ml，将此菌液接种在感病品种‘之豇282’生长10天的幼嫩叶片上，每片叶子接4‑6个点，每个点接10µl菌液，接种后将培养皿置于光照培养架上，光照强度为80‑100µmol/m²/s，温度在25℃，光周期16/8h，保持培养皿内滤纸湿润，培养7‑10天；2)选择步骤1)中‘之豇282’叶片上出现的单个孢子堆，用牙签将之接种在新的‘之豇282’叶片上，利用步骤1）相同方法将孢子扩繁2‑3次，最后获得的即为纯化的锈菌株系，编号为Auv‑1锈菌；Auv‑1锈菌应始终保存在活体的‘之豇282’叶片上，在前一批叶子枯黄前，将之转移至新鲜的叶子上；3)将Auv‑1锈菌在‘之豇282’叶片上大量扩繁，利用含0.1％ Tween‑20的蒸馏水清洗孢子，用4层纱布过滤菌丝后制成10⁵/mL孢子悬浮液。