[发明专利]结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法

摘要

本发明公开了一种结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法，依次进行如下步骤：中空纤维的灭菌；中空纤维预先铺被胶原；将Caco‑2细胞悬液注入至中空纤维内腔置于37±0.2℃培养箱中，使用驱动装置使中空纤维沿轴向旋转，转速为转90度/小时，旋转时间为4h，从而便于细胞的均匀贴附；然后将培养有细胞的中空纤维置于培养板中，在培养板的每孔加入2～3mL培养基，将培养板放入37±0.2℃培养箱中进行培养；每1～2天更换一次培养基。本发明公开了一种能够模拟人体组织微观形态的小肠细胞中空纤维膜反应器的构建方法，使其能够适用于研究功能性成分转运吸收行为的研究。

主权项

结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法，其特征是依次进行如下步骤：1)、中空纤维的灭菌：将中空纤维切成2～4cm长的小段，浸泡于PBS缓冲溶液中，然后一同置于蒸汽高压灭菌锅灭菌20min；待灭菌完毕，在超净台中取出中空纤维置于平皿上铺开风干；2)、中空纤维预先铺被胶原：首先将I型鼠尾胶原稀释配制成浓度为0.7～0.8mg/mL鼠尾胶原溶液，然后将上述鼠尾胶原溶液注满平躺状态下的步骤1)所得的灭菌后中空纤维的内腔；接着静置20～40min；3)、将Caco‑2细胞悬液计数后稀释到5×10⁶cells/mL注入至步骤2)所得的中空纤维内腔，直至该中空纤维内腔充满Caco‑2细胞悬液，置于37±0.2℃培养箱中，使用驱动装置使中空纤维沿轴向旋转，转速为转90度/小时，旋转时间为4h；4)、旋转4h后，将培养有细胞的中空纤维置于培养板中，在培养板的每孔加入2～3mL培养基，将培养板放入37±0.2℃培养箱中进行培养；每1～2天更换一次培养基。