[发明专利]一种有机整体小柱的制备及有机整体小柱和应用

摘要

本发明涉及一种Ti(IV)‑IMAC有机整体小柱的制备，并将其用于微量生物样品的磷酸化蛋白质组学分析。该有机整体柱材料是聚甲基丙烯酸酯类高聚物，含有丰富的孔结构，比表面积高，钛离子的富集活性位点多；与此同时，由于其亲水性的材料表面，在磷酸肽富集方面展现出了强大的富集能力。将其用于5g HeLa细胞的磷酸化蛋白质组学分析，平均鉴定到了超过1000个以上的非冗余磷酸化位点，且富集特异性高达92.5％。更重要的是，该Ti(IV)‑IMAC有机整体小柱制备简单，相比较填充小柱，它可以通过光诱导的自由基聚合反应仅需数分钟就制备完成；且无需进行塞子的制备，在很大程度上减少富集材料的准备时间。

主权项

1.一种有机整体小柱的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）配置甲醇与1, 4‑丁二醇的混合溶液，其体积比为1:2‑2:1；（2）使用上述步骤（1）得到的甲醇/1, 4‑丁二醇混合溶液配置二苯甲酮溶液，其质量体积分数为0.05 ‑0.20 g/mL；（3）取上述步骤（2）中得到的二苯甲酮溶液5 μL‑20 μL，加入到20 μL GE Loader Tip枪头内，置于紫外发生器中，于365 nm波长紫外光下照射反应5‑20分钟；离心去除GE Loader tip枪头内的二苯甲酮溶液；（4）重复上述步骤（3）的过程1‑4次；（5）取2 μL‑4 μL聚合液，加入到步骤（4）中准备好的GE Loader tip枪头内，置于紫外发生器（XL‑1500 A, Spectronics公司, New York, USA）中，于365 nm波长下照射反应5‑20分钟，得到磷酸基离心小柱；聚合液溶剂的体积组成为：12%‑15% EGMP（乙烯基乙二醇甲基丙烯磷酸酯）、40.0‑49.0% DMSO（二甲基亚砜）、7.0‑10.0% DMF（二甲基甲酰胺）、32.0‑35.0%十二烷醇；溶质为0.05‑0.20 g/mL Bis（亚甲基双丙烯酰胺）；（6）配置40‑60 mg/mL硫酸钛水溶液，加入到上述步骤（5）中制备好的磷酸基离心小柱内，4000‑8000 g转速下离心反应10‑20分钟，弃掉离心分离出的液体；重复上述操作过程2‑4次；（7）配置洗涤水溶液1，其中，乙腈的体积分数为20‑40%、三氟乙酸的体积分数为0.1‑0.3%、余量为水，在4000‑8000 g转速下离心洗涤步骤（6）得到的小柱，弃掉离心分离出的液体；重复上述操作过程4‑6次；（8）配置洗涤水溶液2，其中，氯化钠的摩尔浓度为150‑300 mM、余量为水，在4000‑8000 g转速下离心洗涤步骤（7）得到的小柱，弃掉离心分离出的液体；重复上述操作过程4‑6次；（9）用去离子水洗涤上述步骤（8）中的离心小柱，在4000‑8000 g转速下离心洗涤，弃掉离心分离出的液体；重复上述操作过程4‑6次，获得所需产物Ti (IV)‑IMAC有机整体小柱。