[发明专利]一种滁菊叶片离体高效再生的方法

摘要

本发明公开一种滁菊叶片离体高效再生的方法，包括以下步骤1)取材选取滁菊叶片作为外植体；2)切片3)愈伤组织的诱导4)愈伤组织的增殖；5)愈伤组织的分化；6)不定芽的增殖和伸长；7)生根待不定芽伸长至2～3cm,并伴有2～3个完全伸展的叶子时进行生根培养。本发明具有取材方便、材料丰富；再生效率高，愈伤组织诱导率高达100％，分化率高达95％，生根率高达100％；再生速度快，繁殖系数高，且能实现对获得的无菌苗叶片的进行进一步的扩大繁殖，为优良滁菊株系的快速繁殖和品种改良提供了重要的技术支持的优点。

主权项

一种滁菊叶片离体高效再生的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)取材：选取滁菊叶片作为外植体；2)切片：将步骤1)中的滁菊叶片进行切片；3)愈伤组织的诱导:将步骤2)中的切片接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织的诱导培养；4)愈伤组织的增殖：将步骤3)中诱导的切片愈伤组织接种于增殖培养基中进行愈伤组织的增殖；5)愈伤组织的分化：将步骤4)中增殖后的愈伤组织切块并转接于分化培养基中进行愈伤组织的分化；6)不定芽的增殖和伸长：将步骤5)中分化出不定芽的愈伤组织转接于不定芽增殖和伸长培养基中进行不定芽的增殖和伸长培养；7)生根：待不定芽伸长至2～3cm,并伴有2～3个完全伸展的叶子时进行生根培养；其中，所述步骤3)中愈伤组织诱导培养基包括MS+0.1～3.0mg/L TDZ+0.01～0.05mg/L 6‑BA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8；所述步骤4)中愈伤组织增殖培养基为MS+0.2～2.0mg/L TDZ+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8；所述步骤5)中愈伤组织的分化培养基为MS+0.2～1.0mg/L TDZ+0.05～0.2mg/L 6‑BA+0.1～1.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8；所述步骤6)中不定芽增殖和伸长培养基为MS+0.5～2.0mg/L 6‑BA+0.05～0.2mg/L TDZ+0.2～2.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8；所述步骤7)中的生根培养基为1/2MS+0.05～0.3mg/L IBA+0.05～0.5mg/L IAA+20g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8。