[发明专利]一种基于亲和层析柱的乌司他丁纯化方法在审
| 申请号： | 201610280456.7 | 申请日： | 2016-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN105753974A | 公开（公告）日： | 2016-07-13 |
| 发明（设计）人： | 王旭;郑少亮;许文勤;肖益热 | 申请（专利权）人： | 广东天普生化医药股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/81 | 分类号： | C07K14/81;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/16 |
| 代理公司： | 北京精金石专利代理事务所(普通合伙) 11470 | 代理人： | 刘晔 |
| 地址： | 510520 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于亲和层析柱的乌司他丁纯化方法，该方法包括以下步骤：尿液处理、疏水柱层析、亲和层析、凝胶过滤层析、洗涤、冻干，最后所得到的乌司他丁经过纯化试验发现乌司他丁的总收率提高到85％以上，总效价在6500iu/mg以上，采用了层析柱纯化处理，操作简单，且优选的填料和流速等参数提高了生产效率，大大降低生产成本，具有进一步开发利用的价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 亲和 层析 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种基于亲和层析柱的乌司他丁纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取适量的pH值小于6.5的澄清尿液，加入适量的壳聚糖，并用精密pH试纸测定，调节尿液pH值到5.0‑6.0；吸附完全后用氨水洗脱1.0‑2.0h，再经过3‑4kg硫酸铵盐析，静置、沉淀、干燥后即得乌司他丁粗品；(2)疏水柱层析，对乌司他丁粗品预处理，使用平衡液A平衡，控制上样速度并用平衡缓冲液A复平衡，使用洗脱液B洗脱；(3)亲和层析，使用平衡液A平衡，控制上样速度并用平衡缓冲液A复平衡，使用洗脱液C洗脱；(4)凝胶过滤层析，使用平衡液D平衡，控制上样速度并使用洗脱液E洗脱；(5)凝胶过滤层析洗脱液超滤至57.5mL；(6)洗涤：将步骤(5)的超滤液离心，固体用无水乙醇脱水两次，离心，弃去上清液，留取沉淀物；(7)冻干：将步骤(6)的沉淀物装入盘进冻干机，冻干即得乌司他丁。
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