[发明专利]基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法

摘要

本发明涉及一种基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法。将两组不同生理或病理条件的整体蛋白分别作为控制组与疾病组，分别进行赖氨酸ε‑氨基及N端氨基全部同重标记，分别标记为‑N(C1113CH11N+OCH2)2和‑N(C12H1115N+OCH2)2，其单个标记后氨基的质量差异为12.6mDa；同重标记后两组蛋白按等比例混合进行高分辨质谱和串级质谱分析得到一个数据组；对数据组进行定性、定量数据库搜索，得到蛋白质的ID及疾病组每一个蛋白质相对于控制组的相对比例，即疾病条件下所有蛋白的上调或下调情况。与现有技术相比，本发明不仅标记效率高，准确度高，便宜易得；而且自带电荷，将大大增强带标记蛋白的电喷雾电离和质谱分析灵敏度和效率。适用于整体蛋白质基于高分辨串级质谱分析的定量。

主权项

一种基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将两组不同生理或病理条件的整体蛋白分别作为控制组与疾病组，分别进行赖氨酸ε‑氨基及N端氨基全部同重标记，分别标记为‑N(C1113CH11N+OCH2)2和‑N(C12H1115N+OCH2)2，其单个标记后氨基的质量差异为12.6mDa；(2)同重标记后两组蛋白按等比例混合进行高分辨质谱和串级质谱分析得到一个数据组；(3)对数据组进行定性、定量数据库搜索，得到蛋白质的ID及疾病组每一个蛋白质相对于控制组的相对比例，即疾病条件下所有蛋白的上调或下调情况，上调或下调倍数最大的蛋白即为与该疾病发生、发展相关的蛋白；步骤(1)中，控制组蛋白或疾病组蛋白，一组蛋白质用氰基硼氢化钠和含13C的N(3‑醛基‑4‑羟基苄基)氯化吡啶鎓盐标记，另一组蛋白质用氰基硼氢化钠和含15N的N(3‑醛基‑4‑羟基苄基)氯化吡啶鎓盐标记；含13C的N(3‑醛基‑4‑羟基苄基)氯化吡啶鎓盐的合成采用13C标记多聚甲醛，含15N的N(3‑醛基‑4‑羟基苄基)氯化吡啶鎓盐的合成采用15N标记的吡啶。