[发明专利]利用线粒体分子标记鉴定浙江浆蜂的方法

摘要

本发明涉及一种利用线粒体分子标记鉴定浙江浆蜂的方法，该方法步骤如下：(1)蜜蜂取样：从考察的西方蜜蜂蜂群中，随机取封盖期蜜蜂工蜂个体1只，放于冰箱‑20℃保存备用。(2)蜜蜂基因组DNA提取：取步骤(1)中保存的蜜蜂样本的头部和胸部，组织破碎后，使用酚仿抽提法提取DNA，进行DNA浓度和纯度测定。(3)PCR扩增和测序：以步骤(2)中获得的基因组DNA为模板进行PCR反应。引物为：F：5’‑TGATAAAAGAAATATTTTGA‑3’，R：5’‑GAATCTAATTAATAAAAAA‑3’。PCR反应体系为：总体积20μL，10×PCR Buffer(含Mg²⁺)2μL，2.5mM dNTPs 2μL，10μM引物F和R各0.8μL，DNA模板2μL，5U/μLTaq酶0.2μL，灭菌双蒸水补足体积。本发明的有益效果为：利用线粒体DNA分子标记进行浙江浆蜂品种鉴定，操作简单，稳定性好。

主权项

1.一种利用线粒体分子标记鉴定浙江浆蜂的方法，其特征在于：包括下述步骤：(1)蜜蜂取样：从考察的纯种西方蜜蜂蜂群中，随机取封盖期蜜蜂工蜂个体1只，放于冰箱‑20℃保存备用；(2)蜜蜂基因组DNA提取：剪取步骤(1)中保存的蜜蜂样本的头部和胸部，使用酚仿抽提法提取DNA；(3)PCR扩增和测序：以步骤(2)中获得的基因组DNA为模板进行PCR反应，引物为：F：5’‑TGATAAAAGAAATATTTTGA‑3’，R：5’‑GAATCTAATTAATAAAAAA‑3’；PCR反应体系为：总体积20μL，含Mg2+的10×PCR Buffer 2μL，2.5mM dNTPs 2μL，10μM引物F和R各0.8μL，DNA模板2μL，5U/μLTaq酶0.2μL，灭菌双蒸水补足体积；PCR反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，42℃退火2min，72℃延伸2min，共30个循环，72℃后延伸10min；将获得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，确认扩增成功后进行测序；(4)鉴定浙江浆蜂蜂群：将步骤(3)的测序结果使用DNAStar软件进行序列查看和校正，根据等位基因鉴定浙江浆蜂蜂群，当SEQ ID NO.1中第184个碱基等位基因为A时，此蜂群为浙江浆蜂。