[发明专利]一种抗氧化肽混合物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种抗氧化肽混合物的制备方法，利用虾副产物，通过α‑胰凝乳蛋白酶和嗜热菌蛋白酶两步酶解，经Sephadex G‑15凝胶层析和DEAE Sephacel离子交换色谱分离得到1,1‑二苯基‑2‑苦基肼(DPPH)自由基清除能力为10.54±0.03μmol AAE/g pro，铁离子还原能力(FRAP法)为89.29±0.01μmol AAE/g pro的抗氧化肽混合物。本发明还公开了由上述方法得到的抗氧化肽混合物，分子的大小为500‑1000Da。本发明为虾副产物提供了一种新的利用途径，降低了资源浪费和污染，提升了虾副产物的商业价值和利用率。

主权项

1.一种抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：步骤1、将虾剥除虾仁后剩余的虾头与虾壳洗净、烘干、粉碎，过筛，得到虾副产物粉；步骤2、向磷酸盐缓冲液中加入所述虾副产物粉，溶解得到虾副产物总蛋白提取液；步骤3、向60mL所述虾副产物总蛋白提取液中加入24mg 10000U/mgα‑胰凝乳蛋白酶，漩涡混匀，在37℃下水解反应4h，90℃下终止水解反应，离心，取上清，得到所述α‑胰凝乳蛋白酶酶解液；步骤4、向所述α‑胰凝乳蛋白酶酶解液中加入嗜热菌蛋白酶，混匀，进行水解反应；高温终止水解反应，得到嗜热菌蛋白酶酶解液；步骤5、透析所述嗜热菌蛋白酶酶解液，取透析液中500‑1000Da的组分；透析的具体步骤为；将所述嗜热菌蛋白酶酶解液放入1000Da纤维素酯膜透析袋，浸没于去离子水中透析，小于1000Da的组分扩散至去离子水中，将含有小于1000Da的组分的去离子水旋转蒸发浓缩后装入500Da纤维素酯膜透析袋内，浸没于去离子水中透析，得到袋内的500‑1000Da的组分和袋外的小于500Da的组分，取所述500‑1000Da的组分；步骤6、将所述500‑1000Da的组分经凝胶层析分离，取凝胶层析分离产物中抗氧化活性最高的组分G1；步骤7、将所述组分G1经离子交换色谱分离，取抗氧化活性最高的组分H2。