[发明专利]一种石斛胚状体规模培养方法

摘要

本发明公开了一种体外规模化悬浮培养扩增石斛胚状体工艺，其培养过程是石斛带休眠芽茎段，插入到适宜固体培养基上，在合适的培养温度和光照强度下，待起始胚状体长出后，将胚状体剥离，置于相同的上述培养基上扩增，扩增后转入到上述培养基去掉琼脂粉的液体培养基中，置于摇床上以90‑120转/分进行震荡悬浮培养，每瓶按适当接种率接种，根据生长情况继代；经数次继代适应悬浮培养后，转入大规模生物反应器中进行连续扩增，通过调节生物反应器中的指标、更换培养基成分、改变生长调节剂比例成分，改变光源比例，以及分批在线收集等手段，最终达到每25‑60天收获一次，或者连续培养，多糖含量达到15％以上，比生物生长速率达8‑9.5毫克/克·天，并保持常年稳定扩增的大规模铁皮石斛胚状体悬浮培养连续扩增体系。

主权项

一种提高石斛胚状体产量的体外规模化悬浮培养扩增石斛胚状体方法，其培养过程是将胚状体种子按一定接种比例接种到生物反应器中，通过调节氧含量在30‑50％之间，pH为5‑7，固定光源光照10‑20h，光照强度2000‑8000Lx，培养分阶段进行，每一阶段为10‑25天，不同阶段的光质交替变换，所述的光质为红蓝光，所述的交替变换为红蓝光比例由第一阶段的2‑3:4‑5调整为第二阶段的3‑4:4‑6，再由第二阶段的3‑4:4‑6调整为第三阶段的2‑3:4‑5，并以此模式循环；每阶段更换新鲜液体培养基一次。每15‑25天收获石斛胚状体培养物的30‑50％，并补充相应比例的新鲜液体培养基，培养持续进行；所述液体培养基为基本培养基中添加植物生长调节剂，植物生长调节剂为生长素、细胞分裂素的组合或生长素、细胞分裂素与ABA的组合，生长素与细胞分裂素比例控制在3:1，总浓度在0.05‑5mg/L调整。