[发明专利]伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法

摘要

本发明公开了一种伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，以原儿茶酸为参照物，采用高效液相色谱进行梯度洗脱获得了壮药滇桂艾纳香药材共有模式的指纹图谱。指纹图谱共有色谱峰21个，它能充分反应伊血安颗粒的化学成分，信息量丰富，方法精密度、重现性和稳定性好，对伊血安颗粒的质量控制和临床疗效具有重要意义。

主权项

一种伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：（1）对照品溶液的准备：原儿茶酸标准品，加入甲醇定容，制得参照物溶液；（2）供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加水溶解，加稀盐酸调节pH，搅匀，静置，滤过，加水饱和正丁醇萃取3~6次，分取出正丁醇提取液，合并正丁醇提取液，静置，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇溶解，离心，取上清液，得供试品溶液；（3）高效液相色谱仪的色谱条件：色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱，4.6mm×250mm，5μm；保护柱：Phenomenex C18，4×3.0mm；流动相：甲醇‑0.1%冰乙酸；梯度洗脱程序：时间梯度0min→11min→16min→29min→30min→35min→45min→55min→70min→95min；对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相B0.1％冰乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度5％→16％→17％→30％→34％→34％→35％→45％→45％→70％，流动相B的体积百分数梯度95％→84％→83％→70％→66％→66％→65％→55％→55％→30％；紫外检测波长：256nm；流速：1.0mL·min‑1；柱温：25℃；（4）测定：吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照步骤（3）的色谱条件测定，得到指纹图谱；所述指纹图谱共有色谱峰21个，其平均保留时间分别为：1号峰3.234min、2号峰5.962min、3号峰11.023min、4号峰15.353min、5号峰16.521min、6号峰24.498min、7号峰27.158min、8号峰30.877min、9号峰32.29min、10号峰34.752min、11号峰36.182min、12号峰37.968min、13号峰38.708min、14号峰56.509min、15号峰58.989min、16号峰59.670min、17号峰66.895min、18号峰68.358min、19号峰69.319min、20号峰85.217min、21号峰91.016min；所述伊血安颗粒的组分包括滇桂艾纳香、益母草、延胡索和甘草，其中1号峰~21号峰来源于滇桂艾纳香，9号峰来源于益母草，10、11号峰来源于延胡索，6、14、15、16号峰来源于甘草。