[发明专利]一种手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法

摘要

本发明涉及手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法，可有效解决现有技术检测敏感度低，准确率低，容易出现漏检，标本采集困难的问题，方法是，首先将反应膜粘贴到背衬中心上，反应膜上喷涂检测线和对照线，再将吸水垫压到反应膜靠近背衬末端的一侧，胶体金垫压到反应膜的另一侧，样品垫压到胶体金垫的另一侧，样品垫、胶体金垫、反应膜和吸水垫皆用强力胶固定于背衬上，用切条机沿背衬横截面方向切成4mm宽的条，将试纸条装在试纸壳内，试纸壳上开有样本孔和检测结果区；本发明是利用抗肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型特异性单克隆抗体制备的高敏感性手足口病病原快速检测试纸，检测敏感度好，准确率高，不容易出现漏检。

主权项

一种手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法，其特征在于，首先将反应膜（4）粘贴到背衬（7）中心上，反应膜（4）上喷涂检测线（3）和对照线（5），再将吸水垫（6）压到反应膜（4）靠近背衬末端的一侧，胶体金垫（2）压到反应膜（4）的另一侧，样品垫（1）压到胶体金垫（2）的另一侧，样品垫、胶体金垫、反应膜和吸水垫皆用强力胶固定于背衬上，用切条机沿背衬横截面方向切成4mm宽的条，将试纸条装在试纸壳（8）内，试纸壳（8）上开有样本孔（9）和检测结果区（10）；所述的样品垫（1）是由样品处理液和玻纤膜制成，方法是，由20g牛血清白蛋白、5g曲拉通‑100和0.01mol、pH为7.4的磷酸缓冲液加水至1000ml制成样品处理液，把玻纤膜裁切成22mm宽的条，然后在每0.8cm长的玻纤膜上喷涂100μL样品处理液，37℃干燥过夜，成样品垫（1）；所述的胶体金垫（2）是由玻纤膜上喷涂金标抗体液制成，方法是，将玻纤膜裁切成7mm宽的条，每1.7cm长的玻纤膜上喷涂100μL金标抗体液，冷冻真空干燥或加入干燥剂晾干，再密闭在密闭容器中静置12小时，即成胶体金垫（2）；金标抗体液的制备，方法是：1）胶体金稀释液的配制，胶体金稀释液是由10g牛血清白蛋白、25g蔗糖、0.5g吐温‑20、1g叠氮钠和0.01mol、pH为7.4的磷酸缓冲液加水至1000mL制成；2）胶体金颗粒溶液的配制：取质量浓度为0.01%氯金酸水溶液50ml，微波加热至煮沸，加入质量浓度为1%柠檬酸三钠水溶液600μL，加热至出现酒红色，再加入50ml、4℃预冷的电导率为18.25的纯净水，即成40nm胶体金颗粒溶液，胶体金颗粒溶液吸收峰波长为532‑534nm；Abs大于0.400；3）胶体金标记抗体的配制：取胶体金颗粒溶液10ml，磁力搅拌下，加入体积浓度为30%的双氧水水溶液32μL；室温磁力搅拌混合10min，再加入0.2M的碳酸钾水溶液300μL，室温磁力搅拌10min，加入0.2mg纯化冻干的抗手足口病病原单克隆抗体CE‑6，抗手足口病病原单克隆抗体CE‑6冻干前缓冲液为0.01M，pH7.4的磷酸缓冲液；室温磁力搅拌60min，加入0.1g牛血清白蛋白，室温磁力搅拌混匀10min后，再加入0.01g聚乙二醇6000，室温磁力搅拌30min，得金标抗体，将金标抗体移入离心管，在4℃，用Himac CR21G离心机浓缩，8000rpm离心10min，弃去上清，得酒红色沉淀，即为胶体金标记抗体；4）金标抗体液的配制：胶体金标记抗体用胶体金稀释液溶解以置换溶液体系，然后用胶体金稀释液稀释金标抗体，稀释后的金标抗体最高吸收峰波长532‑534nm，吸光度大于0.400Abs；所述的检测线（3）和对照线（5）分别是由检测抗体点膜液、对照抗体点膜液喷涂在反应膜（4）上制成，方法是：1）配制点膜稀释液：由0.01mol、pH为7.4的磷酸缓冲液，0.15mol氯化钠，10mol乙二胺四乙酸，1g叠氮钠，30g的甲醇加水至1000mL制成；2）配制检测抗体点膜液：将纯化冻干的抗手足口病病原单克隆抗体CE‑24用点膜稀释液稀释至2mg/mL，抗手足口病病原单克隆抗体CE‑24纯度大于90%，比活性大于10^‑5效价/mg蛋白；3）配制对照抗体点膜液：将比活性大于10^‑7/mg的山羊抗小鼠多抗用点膜稀释液稀释至0.8mg/mL；4）制备检测线和对照线：先将反应膜贴到背衬的相应位置，再用点膜机将检测抗体点膜液及对照抗体点膜液划到反应膜上的相应位置，检测线和对照线的喷制均按每厘米检测线用2μL点膜液喷制，室温晾干，即成。