[发明专利]一种同时检测食品中氨基酸和生物胺的分析方法

摘要

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种同时检测食品中氨基酸和生物胺的分析方法。该方法首次以4’‑碳酰氯‑罗丹明为衍生试剂，使用超声辅助‑原位衍生‑分散液液微萃取技术对食品中的氨基酸和生物胺进行同时衍生化，并利用多反应监测模式的超高效液相色谱三重四极杆串联质谱进行定性定量检测分析。本发明的方法可用于同时分析检测8种氨基酸和9种生物胺，以1,7‑二氨基庚烷为内标物，通过内标法定量，准确得到不同食品中氨基酸和生物胺的含量。该方法具有简单、快速、灵敏度高、选择性好等优势，且得到良好的回收率结果。对于食品质量的评价和监督提供了准确、可靠的技术手段。

主权项

一种同时检测食品中氨基酸和生物胺的分析方法，其特征在于：所述的氨基酸和生物胺在温和条件下与衍生试剂4’‑碳酰氯‑罗丹明发生原位衍生反应，得到的衍生化产物经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测；具体包括以下步骤：a. 超声辅助‑原位衍生‑分散液液微萃取：取10‑100 µL标准品混合溶液或预处理的待测样品，10‑30 µL内标物溶液、500‑800 µL pH 8.0‑10.0的 NaHCO3‑Na2CO3缓冲溶液，加入离心管中，注入60‑200 µL萃取剂和200‑300 µL 4’‑碳酰氯‑罗丹明‑分散剂溶液，摇匀后密封，在温度10‑60 ºC水浴中超声波振荡反应1‑5分钟；离心分离，所得沉积相取出后用乙腈定容到200 µL，得氨基酸和生物胺衍生物萃取物溶液；b. 将氨基酸和生物胺衍生物萃取物溶液经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测；所述4’‑碳酰氯‑罗丹明采用以下方法制备而成：将0.922 g 4’‑羧基‑罗丹明加入30 mL氯化亚砜，滴入0.1 mL N,N‑二甲基甲酰胺，磁力搅拌，升温至50～80℃，反应5～6 h，减压蒸除氯化亚砜，冷却至室温，得紫色固体，用乙醚重结晶，得紫色针状晶体即为4’‑碳酰氯‑罗丹明;所述内标物溶液为1×10‑5 mol/L 的1,7‑二氨基庚烷的乙腈溶液；所述萃取剂为1‑溴‑3‑甲基丁烷，溴代环己烷，1‑溴代辛烷或溴苯；所述的分散剂为丙酮，乙腈，甲醇或乙醇；所述氨基酸为酪氨酸(Tyr)，组氨酸，2‑苯乙氨酸，色氨酸，赖氨酸，鸟氨酸，精氨酸，瓜氨酸；所述生物胺为酪胺，组胺，2‑苯乙胺，色胺，尸胺，腐胺，胍基丁胺，亚精胺，精胺；所述超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统中色谱分离使用安捷伦SB C18色谱柱：2.1 mm × 50 mm，1.8 µm，进样体积为2 µL，柱温30 ℃，采用梯度洗脱法；所述梯度洗脱法，时间为10 min，流速为0.2 mL/min，流动相A为5%乙腈水溶液含有0.1%甲酸，流动相B为乙腈含有0.1%甲酸，0 min流动相组成为80%A+20%B，6 min时35%A+65%B，8.5 min时5%A+95%B，10 min时5%A+95%B；所述质谱的条件为：干燥气温度300℃，流速10 L/min，喷雾器气压40 psi，鞘气温度280℃，流速11 L/min，毛细管电压3.5 kV。