[发明专利]一种产松柏醇的工程菌、构建方法及产松柏醇的用途

摘要

本发明公开了一种产松柏醇的工程菌、构建方法及产松柏醇的用途，构建方法：全化学合成TAL、COMT、4CL和CCR基因；PCR克隆hpaBC、yahK、metK和pntAB基因；全化学合成pBPE001、pBPE002、pBPE003；将基因TAL、hpaBC、COMT与pBPE001连接，得到pTHM；将基因4CL、CCR、yahK与pBPE002连接，得到pLRH；将基因pntAB、metK与pBPE003连接，得到pNAM；将T7RNA聚合酶基因整合到SyBE‑002447底盘菌株，得到SyBE‑002447(DE3)菌株；将pTHM、pLRH和pNAM转化到SyBE‑002447(DE3)，得到工程菌SyBE‑CNF。以葡萄糖为碳源，进行发酵生产松柏醇。本发明使用工程大肠杆菌生产松柏醇，可解决松柏醇的来源问题，降低成本。

主权项

产松柏醇的工程菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：(1)全化学合成TAL、COMT、4CL和CCR基因，所述基因TAL、COMT、4CL和CCR的核苷酸序列依次用SEQ ID No.05，SEQ ID No.06，SEQ ID No.07，SEQ ID No.08所示；(2)PCR克隆hpaBC、yahK、metK和pntAB基因；所述基因hpaBC、yahK、metK、pntAB的核苷酸序列依次用SEQ ID No.01，SEQ ID No.02，SEQ ID No.03，SEQ ID No.04所示；(3)全化学合成以SEQ ID No.09所示的表达载体骨架pBPE001、以SEQ ID No.10所示的表达载体骨架pBPE002、以SEQ ID No.11所示的表达载体骨架pBPE003；(4)将所述基因TAL、hpaBC、COMT与表达载体骨架pBPE001通过酶切连接方式进行连接，得到重组表达载体pTHM；将所述基因4CL、CCR、yahK与表达载体骨架pBPE002通过酶切连接方式进行连接，得到重组表达载体pLRH；将所述基因pntAB、metK与表达载体骨架pBPE003通过酶切连接的方式进行连接，得到重组表达载体pNAM；(5)从大肠杆菌BL21(DE3)菌中克隆得到T7RNA聚合酶基因，通过λRed同源重组技术整合到SyBE‑002447底盘菌株染色体上得到SyBE‑002447(DE3)菌株；(6)将重组表达载体pTHM、重组表达载体pLRH和重组表达载体pNAM转化到底盘菌株SyBE‑002447(DE3)，对单克隆进行筛选，得到工程菌SyBE‑CNF。