[发明专利]链格孢毒素链格孢酚单甲醚胶体金免疫层析试纸条

摘要

本发明涉及食品安全监测领域，具体公开了一种检测链格孢毒素链格孢酚单甲醚(AME)的免疫层析试纸条，包括样品垫、胶体金结合垫、NC膜、吸水垫和PVC底板，胶体金结合垫上包被有胶体金‑AME单抗复合物，NC膜上设置了检测线和质控线，检测线上固定有浓度为1mg/mL的AME‑OVA偶联抗原，质控线上固定有浓度为1mg/mL的羊抗鼠二抗。本发明为采用一步间接竞争免疫层析试纸条技术快速定性或半定量检测果蔬样本中链格孢毒素AME含量的胶体金试纸条，检测灵敏度达到10ng/mL，并且检测专一性强，操作简单，经济实用，适合于现场检测，可广泛应用于果蔬大批量样本中AME的分析检测及快速筛查。

主权项

检测链格孢毒素链格孢酚单甲醚(AME)的胶体金免疫层析试纸条，包括样品垫、胶体金结合垫、NC膜、吸水垫和PVC底板，其特征在于，胶体金结合垫上包被有胶体金‑AME单抗复合物；所述胶体金‑AME单抗复合物中AME单抗的制备方法如下：(1)AME羧基化衍生物半抗原制备：将AME，溴丁酸甲酯和碳酸钾溶于甲酰胺溶液，50℃磁力搅拌反应2h；待反应混合物冷却后，加水稀释，随后用酒精进行萃取得到沉淀中间产物；将沉淀溶于甲醇和四氢呋喃混合液，随后加入到含有氢氧化锂的水溶液中，室温条件下反应5h，得到羧基化修饰的AME半抗原；(2)AME‑BSA抗原制备：将AME半抗原溶于N,N‑二甲基甲酰胺中；加入二环己基碳二亚胺搅拌；加入N‑羟基琥珀酰亚胺，室温避光磁力搅拌；离心，除去沉淀物N,N′‑二环已基脲；将上清液逐滴加到由磷酸缓冲液配制的BSA溶液中，室温避光搅拌；用0.1mol/L的PBS溶液透析3d，每天换液3次，即得AME‑BSA抗原；(3)抗体筛选与纯化。