[发明专利]C-反应蛋白免疫胶乳微球制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种C‑反应蛋白免疫胶乳微球制备方法及应用，C‑反应蛋白免疫胶乳微球制备方法优化化学交联方法，将聚苯乙烯微球的羧基在低pH条件下活化，与高pH条件溶解的抗体上的氨基耦合，两者的混合液呈中性，在低温下偶联12～24h，既保证了抗体的偶联效率，同时极大程度的降低了活化剂对抗体活性的破坏。采用本发明方法制备的免疫胶乳微球制成的胶乳增强免疫比浊法C‑反应蛋白测定试剂盒具有灵敏度高、定量准确、重复性好、性质稳定的特点，其定量的线性范围在0.1～20mg/L，可应用于全自动生化分析仪或凝血分析仪，操作快速、简单，从检测至采集结果只需5～10分钟，具有较好的临床应用前景。 1

主权项

1.一种C‑反应蛋白免疫胶乳微球制备方法，步骤如下：1)准备粒径范围50～200nm的聚苯乙烯微球，聚苯乙烯微球首先用浓度为50mmol/L的2‑吗啉乙磺酸缓冲液稀释至终浓度0.8～1.2％w/v，得到pH为5.5～6.5的微球溶液；2)以2‑吗啉乙磺酸缓冲液溶解碳化二亚胺，得到浓度为10mg/mL的碳化二亚胺溶液；3)以微球溶液中所含聚苯乙烯微球的重量为计，按每10mg聚苯乙烯微球添加50～60μL的比例将碳化二亚胺溶液滴加至微球溶液中，2～8℃震荡活化1h，震荡速度为30～50r/min，得到活化聚苯乙烯微球溶液；4)将浓度≥10mg/mL的CRP多克隆抗体在pH8.5～9.5条件下溶解，溶剂是50mmol/L的硼酸盐缓冲液，使抗体终浓度在0.5～2mg/mL之间，得到CRP多克隆抗体溶液，储存于2～8℃备用；5)将CRP多克隆抗体溶液滴加至活化聚苯乙烯微球溶液中，直至抗体与微球质量比为0.05～0.2:1，整个滴加过程持续4～7min，使活化聚苯乙烯微球与抗体上的氨基耦合，两者的混合液呈中性，之后0～4℃震荡12～24h，震荡速度为30～50r/min，即得C‑反应蛋白免疫胶乳微球。