[发明专利]一种利用发夹引物进行多重PCR的方法有效
| 申请号： | 201610736856.4 | 申请日： | 2016-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN106282353B | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 肖君华;陈科;陈轶群 | 申请（专利权）人： | 上海翼和应用生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C40B50/06 |
| 代理公司： | 31233 上海泰能知识产权代理事务所 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 200233 上海市徐汇区漕*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用发夹引物进行多重PCR的方法和试剂盒、以及在建立二代测序平台文库中的应用。发夹引物3’端特异序列与目标区段完全配对，解链温度在80℃以上，在PCR反应时只在变性程序中打开发夹结构。可以有效减少非特异扩增和引物二聚体的形成，提高多重PCR产物的均一性。本发明还利用多重发夹引物进行两轮PCR反应快速方便地构建二代测序文库，并通过携带不同条形码序列的接头引物以区分不同模板，而不同的接头引物携带相同的通用扩增引物，以减少不同模板扩增产物的差异。 | ||
| 搜索关键词： | 发夹 引物 接头引物 通用扩增引物 多重PCR产物 条形码序列 引物二聚体 测序平台 测序文库 发夹结构 扩增产物 目标区段 特异扩增 特异序列 有效减少 携带 多重PCR 均一性 试剂盒 变性 构建 解链 配对 文库 应用 | ||
【主权项】：
1.一种利用发夹引物进行多重PCR的非疾病的诊断与治疗方法，其特征在于，与目标区段序列特异性配对的引物是发夹引物，所说发夹引物的3’端与目标区段序列特异性配对，发夹引物的5’端与3’端序列配对，所说发夹引物的解链温度不低于80℃，且低于多重PCR的变性温度，所说发夹引物除5’端与3’端配对序列之外的环部为通用序列，在同一PCR反应中的上下游发夹引物数为两对或者两对以上，所说的发夹引物3’末端的碱基与5’末端的碱基互补配对，以使所说的发夹引物5’末端和3’末端封闭。/n
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