[发明专利]一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗鉴定的方法有效
| 申请号： | 201610740314.4 | 申请日： | 2016-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN106399475B | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 姚辉;马双姣;陈士林;宋经元;杨兵勋;杨培;周红 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院药用植物研究所;浙江天皇药业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6806;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 100193 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗进行鉴定的方法，提供了用于铁皮枫斗鉴定的标准序列，可有效解决铁皮枫斗药材分子鉴定问题。具体步骤如下：(1)设计两对引物对ITS2序列分段进行PCR扩增；(2)对扩增结果测序后，按重叠区域连接在一起，获得ITS2序列；(3)与本发明标准序列SEQ ID No.1比对，序列相似性大于或等于99％，则鉴定为铁皮石斛。本发明能够实现铁皮枫斗药材、基原植物、种子种苗等的快速、准确鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 铁皮枫斗 标准序列 药材 序列相似性 分子鉴定 两对引物 铁皮石斛 有效解决 种子种苗 重叠区域 原植物 比对 测序 扩增 分段 | ||
【主权项】：
1.一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗进行鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)样品的DNA提取；2)应用两对引物对ITS2序列分段进行PCR扩增；用于分段扩增ITS2序列的引物为：正向DO‑2F：5’‑GCATGGTGGCTCCTCGTG‑3’；反向DO‑2R：5’‑ATGGATTGGGATCACCTAAAA‑3’；正向DO‑3F：5’‑AAAGGCCTATGCTATTGTGA‑3’；反向DO‑3R：5’‑CGCTTATTGATATGCTTAAACTC‑3’；3)对分段扩增结果测序后，按重叠区域连接在一起，获得ITS2序列；4)与SEQ ID No.1所示序列比对分析进行鉴定。
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