[发明专利]便捷的刺激NK细胞增殖和分化的饲养层制备方法在审
| 申请号： | 201610766711.9 | 申请日： | 2016-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN107779433A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 翟雷垒 | 申请（专利权）人： | 天津市康婷生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司12209 | 代理人： | 赵瑶瑶 |
| 地址： | 300200 天津市西青区西青经*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种便捷的刺激NK细胞增殖和分化的饲养层制备方法，步骤如下⑴采集50mL外周血；⑵采用ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞；⑶使用贴壁法分离淋巴和单核细胞，贴壁1个小时；⑷淋巴细胞添加因子培养NK细胞；⑸饥饿培养、共培养10后，收集细胞。本发明提供的便捷的刺激NK细胞增殖和分化的饲养层制备方法在安全性方面，因为是自体但单核细胞诱导的巨噬细胞层，未添加任何异体异源细胞，所以不会产生额外的排异反应引起的发热等症状。 | ||
| 搜索关键词： | 便捷 刺激 nk 细胞 增殖 分化 饲养 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种便捷的刺激NK细胞增殖和分化的饲养层制备方法，其特征在于：步骤如下：⑴采集50mL外周血；⑵采用ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞；⑶使用贴壁法分离淋巴和单核细胞，贴壁1个小时；⑷淋巴细胞添加因子培养NK细胞；⑸单核细胞添加因子，过夜培养；GM‑CSF1000U/mL和IL‑4400U/mL；⑹第二天将单核细胞瓶中悬浮及半贴壁的的iDC重悬，移至新瓶中添加自体血浆培养，用于DC疫苗的制备，原瓶中继续补充因子，补充因子为GM‑CSF和IL‑4，不添加血浆，进行饥饿培养；⑺隔天补充因子，补充因子为GM‑CSF1000U/mL和IL‑4400U/mL，至第五天，巨噬细胞铺满瓶底，此时去除上清，将培养中的NK细胞移入该瓶中进行共培养；⑻十天后可以收集细胞。
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