[发明专利]一种烟草中生物胺的测定方法

摘要

本发明属于一种烟草中生物胺的测定方法，本发明以液液萃取‑串联固相萃取为前处理手段，采用高效液相色谱法‑串联质谱（HPLC‑MS/MS）法测定烟草中的七种生物胺（腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺和色胺）。本发明与文献相比，建立了一种适合于测定烟草中生物胺的方法，建立的方法简单可靠，可以应用于烟草中生物胺的检测；该方法对样品分析简单便捷，检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。

主权项

一种烟草中生物胺的测定方法，其特征在于，包括以下步骤，（1）制备混合系列标准工作溶液：配制具有浓度梯度且含有内标的混合系列标准工作溶液的具体过程如下：配制浓度梯度为0.5，1，2，5，10，25 ng/mL的混合标准工作溶液，每个浓度的混合标准工作溶液的内标1,7‑庚二胺的浓度为10 ng/mL；浓度梯度为0.5，1，2，5，10，25 ng/mL的混合标准工作溶液中，腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺、色胺七种生物胺的浓度分别均为0.5，1，2，5，10，25 ng/mL；（2）样品萃取：将粉碎后烟草按固液比1 g:10mL ~1 g:40mL加入到甲酸水溶液‑乙腈混合液中，加入100μL 500 ng/mL内标1,7‑庚二胺溶液，混匀后10000~16000转/min离心4min，取出上清液，将滤渣按固液比1 g:10mL ~1 g:40mL加入到甲酸水溶液‑乙腈混合液中，混匀后10000~16000转/min离心4min，取出上清液，合并两次得到的上清液，即为样品提取液；（3）固相萃取柱净化：将步骤（2）得到的样品提取液过混合型阳离子交换固相萃取柱，洗脱后取洗脱液干燥，溶解于乙腈水溶液中，过0.22μm微孔滤膜得样品净化液；（4）将步骤（1）得到的含有内标的混合系列标准工作溶液和步骤（3）得到的样品净化液在相同条件下进行HPLC‑MS/MS测定；HPLC‑MS/MS测定的条件如下：色谱条件：选用亲水作用色谱柱，流速为0.2~0.5 mL/min，进样量为5~10 μL；分析时间为14 min；柱温为40℃；流动相为A和B的混合体系，A为甲酸铵和甲酸的混合水溶液，其中甲酸与水的体积比为0.1:100，甲酸铵的含量15~25 mmol/L；B为甲酸乙腈溶液，其中甲酸与乙腈的体积比为0.1:100；采用梯度洗脱，其中B在不同时间段的的体积百分比为：0~1min，95%；1~12 min，95%~45%；12~14min，95%；质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；干燥气温度和流速：290 ℃，11 L/min；雾化器压力：206.85 kPa；鞘气温度和流速：400℃，12 L/min；毛细管电压：3500 V；碎裂电压：380 V；碰撞气：N2；（5）结果计算：由目标分析物峰面积和内标峰面积之比采用内标法进行定量。