[发明专利]双启动子自诱导型重组枯草芽孢杆菌的构建方法与应用有效
| 申请号： | 201610839431.6 | 申请日： | 2016-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN106636170B | 公开（公告）日： | 2019-10-15 |
| 发明（设计）人： | 王腾飞;刘强;王瑞明 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N15/66;C12N1/21;C12N9/90;C12R1/125 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250353 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种双启动子自诱导型重组枯草芽孢杆菌的构建方法与应用。一种重组载体，在穿梭质粒PHT01的KpnI和BamHI两个酶切位点之间插入通过重叠PCR技术连接优化了的启动子Psrf基因与优化了的启动子Pcry3Aa基因获得的双启动子Psrf‑Pcry3Aa基因，在BamHI和AatII两个酶切位点之间插入由柔性连接肽连接得到的RDPE蛋白和海藻糖合成酶TreS的融合蛋白基因。本发明还涉及利用该重组载体构建双启动子自诱导型重组枯草芽孢杆菌的方法及应用。本发明采用双启动子Psrf‑Pcry3Aa自诱导型表达系统自发诱导合成海藻糖合成酶的效果显著优于其它单自诱导型启动子和诱导型启动子表达的效果。 | ||
| 搜索关键词： | 启动子 诱导 重组 枯草 芽孢 杆菌 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种重组载体，其特征在于，在穿梭质粒PHT01的KpnI和BamHI两个酶切位点之间插入通过重叠PCR技术连接优化了的启动子Psrf基因与优化了的启动子Pcry3Aa基因获得的双启动子Psrf‑Pcry3Aa基因，在BamHI和AatII两个酶切位点之间插入由柔性连接肽连接得到的RDPE蛋白基因和海藻糖合成酶基因TreS的融合蛋白基因；所述的优化了的启动子Psrf基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的优化了的启动子Pcry3Aa基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的RDPE蛋白基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述的海藻糖合成酶基因TreS基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
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