[发明专利]基于纳米抗体及免疫磁分离检测谷物中赭曲霉毒素A方法

摘要

本发明公开了一种基于纳米抗体及免疫磁分离检测谷物中赭曲霉毒素A方法，将抗OTA纳米抗体与纳米磁珠结合制备IMB，利用IMB富集谷物中的OTA作为样品前处理方法；再结合斑点免疫法，将OTA‑OVA检测抗原固定在PVDF膜上，磁珠以抗体标记物的形式参与免疫反应，OTA‑OVA与待测物OTA竞争结合抗体，以磁珠是否在PVDF膜聚集来判断检测结果。本发明实现简单、快速的定性检测；该方法无需分析仪器即可裸视读取结果，进而可研发一种新型快速可视化的检测卡专门用于检测谷物中的OTA。

主权项

1.一种基于纳米抗体及免疫磁分离检测谷物中赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，该基于纳米抗体及免疫磁分离检测谷物中赭曲霉毒素A的方法包括以下步骤：采用化学共沉淀法合成磁性纳米颗粒，采用EDC/NHS法将纳米磁珠的羧基与抗OTA纳米抗体上的氨基偶联，制得用于富集谷物样品中OTA的高偶联比免疫磁珠和参与免疫反应体系的低偶联比免疫磁珠；利用免疫磁珠富集技术对待测样品进行前处理后，得到低偶联比免疫磁珠和OTA的混合物；再结合磁珠斑点免疫法，以PVDF膜为固相基质，将OTA‑OVA检测抗原点样于PVDF膜基质上，以抗Histag抗体作为对照，封闭处理；将处理好的PVDF膜投入免疫磁珠和OTA的混合物进行反应，磁珠以抗体标记物的形式参与免疫反应，样品混合物中的游离OTA与膜上的OTA‑OVA抗原竞争结合免疫磁珠；以磁珠在PVDF膜聚集OTA‑OVA量的多少判断样品中的OTA含量；利用免疫磁珠富集技术对待测样品进行前处理方法为：称取5g粉碎后的谷物样品，加入20mL50％甲醇‑PBS，剧烈震荡提取10分钟，离心分离上清，PBS稀释一定比例后加入高偶联比免疫磁珠进行孵育；磁分离除去上清，用1mLPBS洗涤一次；磁珠重悬于120μLPBS中，90℃水浴10min使抗体变性并洗脱OTA，向洗脱溶液中加入10μg低偶联比的免疫磁珠并充分混合。