[发明专利]用于人EGFR基因突变检测的探针、试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及基因检测领域，特别涉及用于人EGFR基因突变检测的探针、试剂盒及其检测方法。本发明提供的用于人EGFR基因突变检测的探针，所述探针包括1‑35探针对中的任一种或多种，每个探针对中包括捕获探针和检测探针；1‑35探针对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1‑70所示。这些探针均是针对人EGFR的热点突变设计，经多次筛选得到，捕获探针与检测探针配合作用，具有灵敏度高，特异性强，结果准确可靠。本发明还提供了人EGFR基因突变检测试剂盒，该试剂盒只需少量检测样本，检测过程利用电场作用，加快反应速率，缩短反应时间，整个检测过程可以在半小时内完成，大大节约检测所需时间，并且检测灵敏度和准确率高。

主权项

1.一种检测人EGFR基因突变的非诊断目的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n将捕获溶液加入到检测孔板中，电场处理3-10个循环，每个循环电场处理的程序为：电压200-500mV，1-5s；电压800-1500mV，1-5s；所述捕获溶液含有以下成分：导电聚合物材料的体积百分数为0.1％～5％，盐离子化合物的浓度为0.01mol/L～2mol/L，捕获探针的浓度为0.5-1.5μmol/L；/n电场处理完毕后采用清洗剂清洗，然后加入待测样本与杂交buffer的混合溶液，电场处理3-10个循环，每个循环电场处理的程序为：电压200-500mV，1-5s；电压300-800mV，1-5s；/n所述清洗剂包括含有质量浓度为0.04％-0.06％SDS的0.1×SSC-2×SSC混合液和含有体积百分数为0.05％-0.15％Tween20的PBS溶液；/n检测孔板清洗，然后加入检测溶液，电场处理3-8个循环，每个循环电场处理的程序为：电压200-500mV，1-5s；电压300-800mV，1-5s；所述检测溶液是以PBS作为溶剂，其中封闭蛋白的重量百分数为0.1％～5％，检测探针的浓度为0.5-1.5μmol/L；所述检测探针上设置有标记物；/n检测孔板清洗，然后加入酶液，孵育后清洗；所述酶液是以PBS作为溶剂，其中封闭蛋白的重量百分数为0.1％～5％，酶的体积百分数为0.05％～0.2％；所述酶上标记有与所述检测探针上设置的标记物结合的物质；/n加入底物，在电压为-100～-300mV的电场处理下读数，得到电流值；/n所述待测样本为体液，所述体液包括血浆、唾液、胸腔积液；/n每个捕获探针和检测探针组成一个探针对；1-35探针对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1-70所示。/n